VeriFi® 热启动聚合酶及预混液

​产品描述​

VeriFi® 热启动聚合酶是一种通用且稳健的具校正活性的酶，采用AptaLock™热启动技术，可实现高度精确的PCR。

改进的DNA结合能力和增强的持续合成能力，显著提升了扩增速度、产量和灵敏度，同时提高了对长片段和困难模板的PCR成功率。​

​产品特点​

• AptaLock™技术，最大化灵敏度和特异性

• 对长片段和/或高GC/高AT含量模板具有更高的成功率（可达17.5 kb以上）

• 支持高温循环 – 变性温度最高可达100°C，更好地解离高GC含量序列

• 保真度比Taq DNA聚合酶高100倍

• 可在室温下进行反应体系设置

• 反应混合液在PCR运行前后均可稳定保存长达24小时

• 产生平末端PCR产物

• 亦提供2x即用型预混液，可选含红色染料，便于直接上样电泳

​应用​

• 高保真PCR

• 长片段PCR

• 多重PCR和高通量PCR

• 定点突变

• 克隆

• 测序

​什么是VeriFi® 热启动聚合酶？​​

VeriFi® 热启动聚合酶是一种单一组分酶，源于具有3'-5'外切核酸酶（校正）活性的Pfu DNA聚合酶。通过专有突变改造，与其天然形式相比，改善了DNA结合能力并提高了持续合成能力，从而缩短延伸时间、提高产量，并能够扩增更长的和更困难的靶标。VeriFi® 热启动聚合酶能够扩增超过17.5 kb的真核基因组模板，对于更简单的DNA模板可扩增更长的片段。大多数应用推荐每kb模板使用30秒的延伸时间。该产品前称为PCRBIO Hot Start VeriFi Polymerase和PCRBIO Hot Start VeriFi Mix (Red)。

VeriFi® 热启动聚合酶配有先进的缓冲体系，包含dNTPs、Mg²⁺和增强剂，能够对广泛范围的靶标和片段大小进行高保真PCR，不受GC或AT含量影响。对于最困难的模板，例如高GC含量序列或具有复杂二级结构的序列，用户可选择在反应体系中添加VeriMax增强剂以改善PCR性能。

该酶也提供便捷的2x即用型预混液形式，包含除引物和模板外的所有反应组分；或提供2x红色预混液，额外含有适用于琼脂糖凝胶电泳直接上样和条带追踪的红色染料。

​​[凝胶图像1说明]：成功扩增具有广泛GC和AT含量范围的模板

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Successful PCR across a broad range of GC and AT content: Amplification of 13 targets with GC content ranging from 28.7% to 83% using VeriFi™ Hot Start Mix. The starting template amount is 30 ng mouse cDNA. Band size is between 99 bp and 274 bp. Cycling conditions were 98 °C 5 min, 40 cycles of 98 °C 15 sec, annealing between 54 °C and 62 °C (depending on target) 15 sec, 72 °C 30 sec. L: PCRBIO Ladder III. VeriFi™ Hot Start Mix is able to amplify templates across a broad range of GC and AT content.

​​[凝胶图像2说明]：比较VeriFi™热启动预混液与领先竞争对手在扩增高GC含量模板方面的性能

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Increased PCR success rates with high GC templates: Amplification of a 600 bp fragment of ATXN2 gene with GC content of 71%. The starting template amount was 5 ng mouse genomic DNA. Reactions were set up using master mix formats (apart from Takara PrimeSTAR GXL DNA Polymerase) and following manufacturers’ recommendations. Cycling conditions were: 99 °C 5 min, then 30 cycles of 99 °C 30 sec, 60 °C 30 sec, 72 °C 45 sec. L: PCRBIO Ladder III. VeriFi™ Hot Start Mix amplifies this high GC sequence with greater sensitivity and specificity compared to leading competitors.

​AptaLock™如何实现热启动PCR？​​

PCRBIO创新的AptaLock™技术使用一种专有的类适配体分子，在40°C以下可逆地抑制酶的3'-5'外切核酸酶活性和5'-3'聚合酶活性。我们独特的聚合酶抑制机制可防止引物二聚体形成和非特异性扩增，从而最大化PCR的灵敏度和特异性。这一特性使VeriFi®热启动聚合酶非常适用于多重PCR，并允许在室温下设置反应。由于AptaLock™技术，反应混合液在PCR运行前后可稳定保存长达24小时，这意味着在高通量检测中具有更高的易用性。

对野生型Pfu酶的专有修饰确保了VeriFi®热启动聚合酶的增强准确性，使其具有极低的错误率，保真度比Taq DNA聚合酶高约100倍。因此，这种新型酶是要求超高准确性的应用（如克隆、定点突变和测序）的理想选择。

​​[AptaLock热启动技术示意图说明]​​

PCRBIO’s innovative AptaLock™ technology uses a proprietary aptamer-like molecule that reversibly inhibits both the 3’-5’ exonuclease activity and 5’-3’ polymerase activity of the enzyme below 40 °C. This unique hot start molecule prevents primer dimer formation and non-specific amplification to maximise the sensitivity and specificity of your PCR.

PCRBIO创新的AptaLock™技术使用一种专有的类适配体分子，在40°C以下可逆地抑制酶的3'-5'外切核酸酶活性和5'-3'聚合酶活性。这种独特的热启动分子可防止引物二聚体形成和非特异性扩增，从而最大化PCR的灵敏度和特异性。

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Superior performance in multiplex reactions: The image shows 10-plex PCR using lambda phage genome (6 targets) and mouse genome (4 targets) at different annealing temperatures (A: 63.0 °C, B: 61.5 °C, C: 60.5 °C). The starting template amount is 1 pg lambda DNA and 1 ng mouse gDNA. Amplicon lengths are between 139 bp and 962 bp. Reactions were set up using master mix formats following manufacturers’ recommendations. Cycling conditions were 95 °C 2 min, 40 cycles of 95 °C 15 sec, annealing A to C 30 sec, 72 °C 90 sec. L: PCRBIO Ladder III. P: reference pool of single products. VeriFi Hot Start Mix displays greater sensitivity and specificity in multiplex when compared to leading competitors.

在多重反应中的卓越性能：图像显示使用λ噬菌体基因组（6个靶标）和小鼠基因组（4个靶标）在不同退火温度下进行的10重PCR。起始模板量为1 pg λDNA和1 ng小鼠gDNA。扩增子长度介于139 bp至962 bp之间。使用预混液形式并按照制造商推荐设置反应。循环条件：95°C 2分钟；95°C 15秒，退火温度A至C 30秒，72°C 90秒，共40个循环。L：PCRBIO Ladder III。P：单一产物的参考池。与领先竞争对手相比，VeriFi热启动预混液在多重PCR中显示出更高的灵敏度和特异性。