概述
qPCRBIO SyGreen® 预混液融合了专利的非抑制性嵌入染料，结合聚合酶技术与缓冲液化学的新成果，为您提供快速、高灵敏度且可重复的染料法实时荧光定量 PCR（qPCR）检测方案。该预混液可通过染料法 qPCR 可靠地定量各类 DNA 模板，包括基因组 DNA、互补 DNA（cDNA）和病毒序列，并能以最高效率检测极低拷贝数的靶标。
qPCRBIO SyGreen® 预混液专为快速、高灵敏度且可重复的染料法实时荧光定量 PCR 设计 ¹，几乎无需优化即可使用。抗体介导的热启动系统可防止引物二聚体和非特异性产物的形成，显著提升反应的灵敏度和特异性。
- 支持超快速循环（变性时间可短至 2 秒，退火 / 延伸时间可短至 2 秒）
- 延伸速率快，可获得更早的循环阈值（Ct 值）
- 市场领先的灵敏度 —— 检测下限显著降低
- 可从复杂模板（包括富含 GC 序列）中特异性扩增目标片段
- 采用非 PCR 抑制性嵌入染料
- 提供易观察的蓝色预混液版本
- 兼容所有实时荧光定量 PCR 仪
- 相对基因表达分析
- 绝对定量检测
- 基因组 DNA、cDNA 和病毒序列的高通量 qPCR 检测
- 极低拷贝数靶标的检测
- 粗提样品的 PCR 扩增
我们的 2× 预混液采用专利 DNA 嵌入染料，与其他常用荧光染料不同，该染料不会抑制 PCR 反应。在标准循环条件下提升 qPCRBIO SyGreen® 预混液灵敏度和一致性的技术创新，同样使其在快速和超快速循环条件下具备行业领先的性能。qPCRBIO SyGreen® 蓝色预混液含有非反应性染料，可提高反应混合液的可视性，便于观察反应板孔中的样品，从而提升移液精度、减少误差，且不影响实时荧光定量 PCR 的检测性能。
使用 qPCRBIO SyGreen 预混液（紫色曲线）扩增 β2 微球蛋白基因的结果。上图为扩增曲线，中图为熔解曲线，下图为扩增效率。与上图中标识的竞品（灰色曲线）进行直接的板上对比。实验使用 5 个梯度稀释的小鼠 cDNA 模板，总反应体积为 10 微升，循环条件采用各竞品推荐的参数。结果显示，与所有竞品相比，qPCRBIO SyGreen 预混液的 Ct 值更早、熔解峰更纯净、扩增效率更优。
Amplification of Beta-2 Microglobulin using qPCRBIO SyGreen Mix (purple curves). Amplification curves are shown in the top panel, melt curves are shown in the middle panel and the efficiencies of amplification are shown in the bottom panel. A direct, on-plate comparison was performed with the competitors identified in the top panel (grey curves). 5 serial dilutions of mouse cDNA template were used in a total reaction volume of 10µL. Cycling conditions were the ones recommended by each of the competitors. qPCRBIO SyGreen Mix displays earlier Ct, cleaner melt peaks and better efficiency compared to all the competitors.
使用 qPCRBIO SyGreen 预混液（紫色曲线）扩增 β2 微球蛋白基因的结果。上图为扩增曲线，中图为熔解曲线，下图为扩增效率。与上图中标识的竞品（灰色曲线）进行直接的板上对比。实验使用 5 个梯度稀释的小鼠 cDNA 模板，总反应体积为 10 微升，循环条件采用各竞品推荐的参数。结果显示，与所有竞品相比，qPCRBIO SyGreen 预混液的 Ct 值更早、熔解峰更纯净、扩增效率更优。
Amplification of Beta-2 Microglobulin using qPCRBIO SyGreen Mix (purple curves). Amplification curves are shown in the top panel, melt curves are shown in the middle panel and the efficiencies of amplification are shown in the bottom panel. A direct, on-plate comparison was performed with the competitors identified in the top panel (grey curves). 5 serial dilutions of mouse cDNA template were used in a total reaction volume of 10µL. Cycling conditions were the ones recommended by each of the competitors. qPCRBIO SyGreen Mix displays earlier Ct, cleaner melt peaks and better efficiency compared to all the competitors.
使用 qPCRBIO SyGreen 预混液（紫色曲线）扩增 γ 肌动蛋白基因的结果。上图为扩增曲线，中图为熔解曲线，下图为扩增效率。与上图中标识的竞品（灰色曲线）进行直接的板上对比。实验使用 5 个梯度稀释的小鼠 cDNA 模板，总反应体积为 10 微升，循环条件采用各竞品推荐的参数。结果显示，与所有竞品相比，qPCRBIO SyGreen 预混液的 Ct 值更早、熔解峰更纯净、扩增效率更优。
Amplification of Gamma Actin using qPCRBIO SyGreen Mix (purple curves). Amplification curves are shown in the top panel, melt curves are shown in the middle panel and the efficiencies of amplification are shown in the bottom panel. A direct, on-plate comparison was performed with the competitors identified in the top panel (grey curves). 5 serial dilutions of mouse cDNA template were used in a total reaction volume of 10µL. Cycling conditions were the ones recommended by each of the competitors. qPCRBIO SyGreen Mix displays earlier Ct, cleaner melt peaks and better efficiency compared to all the competitors.
使用 qPCRBIO SyGreen 预混液（紫色曲线）扩增 β 肌动蛋白基因的结果。上图为扩增曲线，中图为熔解曲线，下图为扩增效率。与上图中标识的竞品（灰色曲线）进行直接的板上对比。实验使用 5 个梯度稀释的小鼠 cDNA 模板，总反应体积为 10 微升，循环条件采用各竞品推荐的参数。结果显示，与所有竞品相比，qPCRBIO SyGreen 预混液的 Ct 值更早、熔解峰更纯净、扩增效率更优。
Amplification of Beta Actin using qPCRBIO SyGreen Mix (purple curves). Amplification curves are shown in the top panel, melt curves are shown in the middle panel and the efficiencies of amplification are shown in the bottom panel. A direct, on-plate comparison was performed with the competitors identified in the top panel (grey curves). 5 serial dilutions of mouse cDNA template were used in a total reaction volume of 10µL. Cycling conditions were the ones recommended by each of the competitors. qPCRBIO SyGreen Mix displays earlier Ct, cleaner melt peaks and better efficiency compared to all the competitors.
一致。SyGreen 和 SYBR Green * 在 qPCR 中通过相同的分子机制产生信号，SyGreen 试剂可作为含 SYBR Green 的预混液的替代选择。如需了解更多关于这两种染料的信息，请访问本页面。
这类嵌入染料具有芳香族和平面结构基团，可嵌入双链 DNA 的小沟中，覆盖约 3.5-4 个核苷酸。染料中的正电荷基团使其能够与带负电的 DNA 骨架结合并稳定存在。由于这种与 DNA 的结合机制，它们无法结合单链核酸（除非形成二级结构）。另一方面，染料嵌入双链 DNA 后，荧光强度可增强高达 1000 倍。当染料嵌入 DNA 碱基对之间时，其发射的荧光强度与结合的染料量（即样品中的 DNA 量）成正比。这一特性可用于凝胶中核酸的可视化，或在实时荧光定量 PCR 仪的荧光计中进行检测。在 qPCR 反应中，随着反应的进行，样品中嵌入染料的分子数量不断增加，导致每个循环的荧光强度相应增强。反应初期，游离染料仅发射基础荧光；反应进行过程中，荧光强度呈指数增长；后期循环中荧光强度趋于平稳，形成典型的 S 形扩增曲线。
- 靶标检测的通用性：将 SyGreen 或 SYBR Green 类染料与引物结合，研究人员可检测任何感兴趣的靶标分子。这种通用性使高通量单重 qPCR 的设计更简便、成本更低。
- 荧光信号的可逆累积：DNA 嵌入染料的使用实现了荧光信号的可逆累积。由于强荧光仅来自嵌入状态的染料，DNA 变性会导致荧光信号减弱。这一特性可通过熔解曲线分析验证特异性，进而快速评估 qPCR 反应的特异性。
- 非特异性信号产生：嵌入染料可与反应管中存在的任何双链 DNA 分子结合，产生非特异性荧光信号。这可能由引物错配、样品中存在相似序列、引物二聚体形成或引物发夹结构导致。为验证结果的可靠性，需进行熔解曲线分析、凝胶电泳或桑格测序等额外实验。
- 单靶标检测：染料法 qPCR 每个反应仅能检测一个靶标。如需定量样品中的多个靶标，需设置相应数量的独立反应。
熔解曲线分析用于确定 qPCR 产物的解链温度（Tm），为产物特异性提供重要参考。该分析在 qPCR 循环程序结束后增加一个额外的热循环步骤：通过逐步升高孵育温度使反应样品逐渐变性，同时在每个温度间隔（如每 0.1-0.5℃）收集荧光数据。将荧光强度数据与温度作图，即可得到熔解曲线。对于仅含特异性产物的反应，在温度接近靶标解链温度前，荧光强度保持稳定，达到解链温度时迅速降至基线。荧光强度降至最大值 50% 时的温度被定义为该分子的解链温度（Tm）。
通过绘制荧光强度的一阶导数（-dRFU）与温度变化（dT）的关系图（即 dRFU/dT 图），可简化反应特异性的评估。对于仅含单一特异性产物的反应，将出现一个以产物 Tm 为中心的抛物线峰，称为熔解峰。
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