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- 库存:
99
- 英文名:
USEN BLOCK(Ultra Sensitive Block)
- 保质期:
12个月
- 供应商:
北京新艾进生物科技有限公司
- 保存条件:
4-30°C
- 规格:
100ml
产品规格:100ml 200ml 500ml 1000ml
核心成分:低分子偶极水合物
用途:用于封闭ELISA WB ICA等免疫检测的固相载体,提高灵敏度
技术特点:
(1)创新低分子偶极水合物封闭机制,背景更低
(2)辅助抗原抗体形成氢键,增强阳性响应值
(3)不含蛋白质成分,减少或消除传统蛋白封闭试剂的交叉反应、糖基化干扰、生物素干扰等问题
优势:辅助提高免疫分析灵敏度
验证数据:
1、糖基化VEGF蛋白包被板子,检测人血清中抗VEGF单抗,detection为羊抗人-HRP
简要:抗VEGF单抗的PK临床生物分析,包被糖基化的VEGF抗原蛋白,detection为羊抗人IgG-HRP,由于人血清中正常IgG的干扰,容易出现较高的背景信号,用USEN BLOCK(Ultra-Sensitive Block)封闭包被板,显著降低背景信号,提高灵敏度。
|
Indicator(A value) |
1%BSA Block |
Superblock |
USEN BLOCK |
|
Blank |
0.142 0.139 |
0.098 0.102 |
0.019 0.018 |
|
Individual1 |
0.097 0.102 |
0.095 0.098 |
0.014 0.015 |
|
Individual2 |
0.112 0.115 |
0.068 0.074 |
0.017 0.016 |
|
Individual3 |
0.140 0.145 |
0.134 0.132 |
0.019 0.018 |
|
2ng/ml S/blank |
0.570 0.566 4.27 |
0.420 0.438 4.29 |
0.685 0.691 37.1 |
|
检出限 |
410pg |
300pg |
30pg |
小结:所有操作步骤一致的情况下USEN BLOCK的信噪比和检出限显著优于1%BSA Block 和Superblock。
2、AAV包被,检测人血清中抗AAV,detection为PG-HRP+TMB指示信号
简要:在AAV类疫苗临床免疫原性分析中,用桥接法检测抗AAV时,因AAV巨大分子量引起的空间位阻效应,强烈抑制双AAV抗原和ADA的桥接,使得分析方法的灵敏度难以满足法规要求的100ng/ml。为了开发灵敏度和选择性符合法规要求的AAV抗药抗体检测方法,研究者采用包被AAV,用蛋白G-HRP作detction的模式,但由于AAV衣壳蛋白结构的复杂性及蛋白G和抗体结合的广谱性,使得正常血清的背景信号异常高,掩盖了抗AAV的正常信号值,依然无法达到100ng/ml的灵敏度。本方法用USEN BLOCK(Ultra-Sensitive Block)很好的解决了这一难题。
|
indicator |
Startingblock |
USEN BLOCK |
||
|
A value |
S/N |
A value |
S/N |
|
|
blank |
0.480 0.420 |
- |
0.035 0.038 |
- |
|
Cal.1 50ng/ml |
0.439 0.456 |
0.99 |
0.125 0.128 |
3.46 |
|
Cal.2 100ng/ml |
0.477 0.420 |
0.99 |
0.181 0.192 |
5.10 |
|
Cal.3 2000ng/ml |
0.798 0.764 |
1.73 |
0.982 0.990 |
27.01 |
小结:用蛋白G法检测人血清样本中抗AAV时,USEN BLOCK背景信号是Startingblock的十二分之一,血清本底A值低于0.040,灵敏度达到50ng/ml,效果优于Startingblock。
3、抗her2单抗的中和抗体分析,detection为人源抗her2单抗-HRP,包被her2靶点蛋白,TMB指示信号,负判读法检测中和抗体。
|
Indicator |
1%BSA Block |
USEN BLOCK |
||
|
A value |
S/N |
A value |
S/N |
|
|
Blank |
1.209 1.208 |
- |
1.847 1.875 |
- |
|
Cal.1 100ng/ml |
1.236 1.229 |
1.02 |
1.645 1.658 |
0.88 |
|
Cal.2 200ng/ml |
1.221 1.238 |
1.01 |
1.486 1.465 |
0.79 |
|
Cal.3 400ng/ml |
1.197 1.172 |
0.98 |
1.259 1.237 |
0.67 |
|
Cal.4 2000ng/ml |
0.956 0.968 |
0.79 |
0.538 0.495 |
0.27 |
小结:对于负判读法中和抗体的检测,和1%BSA封闭液相比,由于USEN BLOCK系统噪声极低,阴阳信号反差明显,使得配体法检测中和抗体的方法开法难度显著降低,分析灵敏度有较大提高。
4、封闭时间及温度对比
简要:包被糖基化的PD1抗原蛋白,检测人血清中抗PD1单抗,detection为羊抗人IgG-HRP,考查不同封闭时间和不同封闭温度下USEN BLOCK的功能效果, 1%BSA封闭液作对照。
|
indicator |
37℃封闭15分钟 |
28℃封闭30分钟 |
8℃封闭60分钟 |
|
Blank(A值) |
1%BSA:0.125 USEN BLOCK:0.029
|
1%BSA:0.131 USEN BLOCK:0.020
|
1%BSA:0.146 USEN BLOCK:0.016
|
|
2ng/ml(A值) |
1%BSA:0.213 USEN BLOCK:0.312
|
1%BSA:0.215 USEN BLOCK:0.298
|
1%BSA:0.209 USEN BLOCK:0.276
|
小结:USEN BLOCK 37℃封闭15分钟,即可达到良好效果,封闭温度较低时,对背景信号值抑制效果更优,阳性响应值也稍低,但信噪比仍然显著优于1%BSA封闭液。
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文献和实验图 1 实验流程与常见问题索引 Q1:染色结果呈阴性,是怎么回事? (1)抗体来源选择错误:本试剂盒二抗为抗兔/鼠,请确保一抗来源的种属为兔源或鼠源。 (2)组织切片本身不存在目的蛋白:可通过 The Human Protein Atlas 数据库或 UniProt数据库查询目的蛋白在细胞或组织中的表达情况。 (3)抗体浓度和质量问题:提高抗体工作浓度或延长孵育时间;确认抗体可进行IHC实验,通过非IHC实验排除抗体质量问题。 (4)脱蜡不完全:可根据切片上是否存在透明颗粒,判断是否存在脱蜡
、臭虫等通过其唾液管将吃得开液排入人体内而引起荨麻疹、红斑等局部皮肤过敏性反应。 3.抗原的性质以相同途径进入人体的抗原,有的引起强速发型超敏反应,有的则不能,虽其确切原因尚不明,但与抗原本身的特性,特别是被T细胞识别的表位的特性有关。有些药物如青霉素,能引起强烈IgE抗体应答。这些药物与蛋白质结合,形成半抗原(药物)- 载体 (蛋白质)结合物,而成为新抗原(neoantigens)。 有些蛋白质抗原与有利于IgE抗体合成的具有佐剂作用
质量不好,会最终导致显影要么漆黑一片,要么啥都没。我们现在用的BD的,很好很稳定,可回收利用。 NC膜,PVDF膜我们都用过, PVDF膜的好处是蛋白载量大,韧性好。唯一的麻烦是事先得用甲醇泡几分钟,目的是为了增强膜的正电荷。甲醇泡完后,得在转移缓冲液里泡一两分钟。4 .关于显色液 我们选用进口超敏ECL显色液。用普通的显色液检测内参一般都没问题,但对于表达量比较低的蛋白就不容易显色出来,而超敏的就不一样,即使蛋白表达量很低,也可以检测出来。5. Western Blot实验关键 Western
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