乙醛脱氢酶活性检测试剂盒(WST-8法)

碧云天研发的乙醛脱氢酶活性检测试剂盒(WST-8法) (Acetaldehyde Dehydrogenase Activity Assay Kit with WST-8)，简称ALDH Activity Assay Kit with WST-8、ALDH Assay Kit with WST-8或醛脱氢酶活性检测试剂盒(Aldehyde Dehydrogenase Activity Assay Kit)，是一种基于WST-8的显色反应，利用吸光度检测，简单、快速、高灵敏、高特异性地对血清、血浆等生物体液、组织、细胞、细菌以及组织或细胞培养上清等样品中乙醛脱氢酶活性进行检测的试剂盒。

醛脱氢酶(Aldehyde dehydrogenase, ALDH)是一组催化醛氧化的酶，有时也被称为乙醛脱氢酶，迄今为止，已在人类基因组中鉴定出19个ALDH基因，其中三种密切相关的脱氢酶与乙醛的代谢最相关：ALDH1A1、ALDH1B1和ALDH2，这些基因参与多种生物过程，包括外源性醛和内源性醛的解毒[1, 2]。根据流行病学研究表明，ALDH2在心血管疾病中发挥关键作用。ALDH2活性增加可以增强细胞对反应性醛的解毒能力来保护心脏，通过调节ALDH2带来了治疗心血管和其它ALDH2相关疾病的可能性[3]。此外，肝中的乙醇脱氢酶负责将乙醇氧化为乙醛，乙醛进一步在乙醛脱氢酶催化下转变为无害的乙酸，因此ALDH2在酒精氧化过程中通过催化乙醛转变为乙酸，从而在维持血液和组织中低水平的乙醛中发挥着重要作用[4]。

本试剂盒的检测原理请参考图1。在乙醛脱氢酶(Aldehyde dehydrogenase, ALDH)的作用下，乙醛(Acetaldehyde)被氧化生成乙酸(Acetic acid)，在这一反应过程中NAD+被还原为NADH；生成的NADH在电子耦合试剂(Electron mediator)的作用下将WST-8还原生成橙黄色的Formazan，在450nm左右有最大吸收峰。反应体系中Formazan的生成量与样品中乙醛脱氢酶的活性成正比。

图1.碧云天乙醛脱氢酶活性检测试剂盒(WST-8法) (S0568)检测原理图。

本试剂盒检测灵敏度高，线性范围宽，样品用量少。本试剂盒在样品体积为20µl时，可以检测活性低至6.6µU的乙醛脱氢酶，在0.33-66.67mU/ml活性范围内有良好的线性关系。本试剂盒提供了乙醛脱氢酶作用产物NADH的标准溶液，可以通过绘制标准曲线(图2)，从而计算出样品中的乙醛脱氢酶活性。

图2.碧云天乙醛脱氢酶活性检测试剂盒(WST-8法) (S0568)检测NADH标准品的标准曲线及阳性对照、小鼠肝脏和HeLa细胞样品的检测效果图。左图，20µl用ALDH Assay Buffer稀释的不同浓度的NADH标准品，加入80µl ALDH反应工作液并混匀后，25ºC避光孵育30分钟，测定A450，本试剂盒在10-2000µM浓度范围内有良好的线性关系。右图，20µl用ALDH Assay Buffer稀释后的阳性对照(ALDH Positive Control)、小鼠肝脏和HeLa细胞裂解样品，加入80µl ALDH反应工作液并混匀后，立即测定A450，25ºC继续孵育30分钟，再次测定A450，本试剂盒检测阳性对照(Positive Control)、70μg蛋白量小鼠肝脏(Mouse Liver)裂解样品和14μg HeLa细胞(HeLa Cell)裂解样品在反应30分钟内的信号变化值如上图所示。实际检测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本试剂盒应用范围广，检测速度快。本试剂盒可用于小鼠、大鼠、人等的血清、血浆等生物体液，细胞培养上清、组织或细胞及细菌等的检测。本试剂盒不仅适合少量样品的检测，也非常适合高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统。整个检测过程约30分钟即可完成。

本试剂盒提供的检测裂解液有一定的通用性。使用本试剂盒中的BeyoLysis™ Buffer H for Metabolic Assay裂解获得的细胞或组织样品，也可以用于碧云天生产的其它代谢类试剂盒中同样使用BeyoLysis™ Buffer H for Metabolic Assay进行裂解的样品检测，通用性强。

按照使用说明操作，用于96孔板检测时，本试剂盒小包装可以进行100次检测。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
S0568S-1	BeyoLysis™ Buffer H for Metabolic Assay	15ml
S0568S-2	ALDH Assay Buffer	15ml
S0568S-3	Substrate A	500µl
S0568S-4	WST-8	200µl
S0568S-5	Substrate B	200µl
S0568S-6	ALDH Positive Control (20X)	20µl
S0568S-7	NADH Standard	5mg
—	说明书	1份

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。其中WST-8、Substrate B和NADH Standard须避光保存。NADH Standard配制成溶液后，须适当分装后-80ºC保存。

注意事项：

本试剂盒采用了乙醛作为待测乙醛脱氢酶的底物，因此可以特异性地检测乙醛脱氢酶的活性而不会检测其它的醛脱氢酶活性。但由于很多其它醛脱氢酶也可以以乙醛为底物，所以本试剂盒检测的是所有以乙醛为底物的醛脱氢酶的总体的乙醛脱氢酶活性。不同的醛脱氢酶对于不同的醛的反应活性很可能会有所不同。

Substrate B具有一定的挥发性，使用后须及时旋紧管盖。

ALDH Assay Buffer和Substrate A需要完全解冻并平衡至室温后再使用，否则会影响检测结果。其它溶液使用时应在冰上进行。

NADH不太稳定，配制成溶液后，须适当分装后于-80ºC保存，并尽快使用。如果发现标准曲线不理想，很有可能是标准品NADH发生了降解。

血清、血浆等样品如果在4ºC保存，保存的时间不得超过2周，否则会影响检测结果的准确性。通常血清样品宜在-20ºC保存，-80ºC保存更佳。

Substrate B对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。