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- 2025年09月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
131
- 英文名：
Bartonella elizabethae Detection Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
英文名称：Bartonella elizabethae Detection Kit
巴尔通体是一群革兰染色阴性、氧化酶阴性、营养条件要求苛刻、兼性细胞内寄生的需氧杆菌，主要寄生在 人、猫、狗和啮齿动物等血管内皮细胞和红细胞内，通过跳蚤、体虱和白蛉等传播，可引起人类卡瑞恩病、猫抓 病、战壕热、杆菌性血管瘤、心内膜炎等疾病。巴尔通体引起的相关疾病属于被忽视的疾病，但引起的心内膜炎 严重影响到人类健康，造成卫生经济负担。本试剂盒利用实时荧光定量 PCR 原理，定性检测巴尔通体，对巴尔通体的诊断及疗效评估有重要指导意义。（本试剂盒已验证的种包括：汉塞巴尔通体、非洲跳鼠巴尔通体、罗莎 利马巴尔通体、克勒巴尔通体、塞内加尔巴尔通体、丽松鼠巴尔通体、瓦氏巴尔通体、五日热巴尔通体、文森巴尔 通体，其他种未验证。）
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，针对巴尔通体基因高度保守区设计一对特异性引物和探针，利用相应仪器对荧光 PCR 过程进行实时监测，实现检测结果的定性分析，用于对可疑感染者的病原学检测。
巴尔通体（BE）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）试剂组成：
| 包装规格 | 50T/盒 |
| BE 反应液 | 500μL×2 管 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| BE 阳性质控品 | 50μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
储存条件及有效期：-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
适用仪器：ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
标本采集：适用于动物和人体的血液、组织等多种样本。
保存和运输：上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输， 严禁反复冻融。
使用方法：
1. 样品处理（样本处理区） 1.1 样本前处理 血液样本：采集宿主动物或人全血标本，应常规无菌采集 EDTA 抗凝的血液样本至少 1 mL，4℃保存。样本运输采用冰壶加冰或泡沫盒加冰密封运输。对于 24 h 内不能立即检测的样本，一周内检测可保存于-20℃冰箱, 如超过一周无法检测的样本应保存于-70℃及以下温度冰箱。 节肢动物及啮齿动物组织样本：将采集的蝉直接装入 2 mL 螺口塑料管内,成蝉独立分装,若蝉或幼蝉按 10 只 1 组分装,在管壁上做好编号,低温运输或-70℃以下保存待检；采集宿主动物组织脾或肾约 50 mg 放入无菌螺口塑料管内，在管壁上标注好脏器名称及编号，低温运输或-70℃以下保存待检。 1.2 核酸提取 推荐采用公司生产的核酸提取试剂（离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进 行操作。 2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N（N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份），每测试反应体系配制如下表： 试剂 BE 反应液 酶液 用量（样本数为 N） 19μL 1μL 将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，20μL/管。 3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。 4. PCR 扩增（核酸扩增区） 4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内； 4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL； 荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。 4.3 推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号 1 1 cycle 95℃ 2min 否 2 45 cycles 95℃ 15sec 否 60℃ 30sec 是 5. 结果分析判定 5.1 结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析 ABI7500 仪器为例） 反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用户可根据实际情况自行调整，Start 值可设在 3～15、End 值可设在 5～20，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击 Analyze 自动获得分析结果。 5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线； 阴性：样本检测结果 Ct 值>40 或无 Ct 值。 5.3 质控标准 阴性质控品：无特异性扩增曲线或无 Ct 值； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数增长期，且Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。 6. 检测方法的局限性 1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关； 2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果； 3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果； 4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果； 5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果； 6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果； 7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
注意事项
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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