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- 2025年09月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Bacillus cereus Detection Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
英文名称：Bacillus cereus Detection Kit
本试剂盒适用于检测水样粪便，疑似污染的水、食物等样本中的蜡样芽孢杆菌，用于蜡样芽孢杆菌感染的辅助诊断。
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对蜡样芽孢杆菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对蜡样芽孢杆菌的核酸进行体外扩增检测，用于对可疑感染者的病原学检测。
蜡样芽孢杆菌(BC)核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）试剂组成：
| 名 称 | 规 格 |
| 核酸提取液 | 1.5mL×2 管 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| BC 反应液 | 1.0mL×1 管 |
| BC 阳性质控品 | 50μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
储存条件及有效期：-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
适用仪器：ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
标本采集：水样便取 0.5~1mL；疑似污染的食物取 1g。
保存和运输：上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
使用方法：
1. 样品处理（样本处理区） 1.1 样本前处理 水样便 13000rpm 离心 2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；疑似污染的水直接取 100μL 1.2 DNA 提取 1) 对上述处理好的标本加入等体积核酸提取液（固体标本加入 50μL 核酸提取液）， 100℃恒温处理10min，13,000 rpm 离心5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP管，-20℃保存； 2) DNA 的提取也可以采用公司生产的DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。 2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表： 试剂 BC 反应液 酶液 用量（样本数为 N） 20μL 1μL 3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。 4. PCR 扩增（核酸扩增区） 4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内； 4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL； 荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye） NONE，请勿选择 ROX 参比荧光。 4.3 推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号 1 1 cycle 95℃ 10min 否 2 40 cycles 94℃ 15sec 否 55℃ 30sec 是 5. 结果分析判定 5.1 结果分析条件设定 设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。 5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线； 可疑：检测通道 3538 或无 Ct 值。 6 质控标准 阴性质控品：Ct 值>38 或无 Ct 值； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。 7.检测方法的局限性 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关； 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果； 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果； 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果； 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果； 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定 量检测不准确的结果； 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
注意事项
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验，如放射线所致白血病。放射性疾病为国家法定职业病。电离辐射对人体损伤的生物学作用机理，一般认为可有：①原发作用，即电离辐射直接作用于对生命有重要意义的大分子，如脱氧核糖核酸、核蛋白及酶类，使其发生电离、激发或化学键断裂，引起分子变性和结构破坏。也可以是电离辐射作用于人体的水分子，发生电离或激发，产生大量具有强氧化作用的OH、H02自由基，再同细胞内有机化合物相互作用，引起变性，继而在体内产生一系列生物学效应。②继发作用，是在一系列原发作用基础上，染色体发生畸变，基因移位或脱失而致细胞核分裂抑制，产生
。随着探针标记的不断改进，检测试剂盒商品化，操作更简便易行。 核酸扩增技术 核酸扩增（又称基因或DNA扩增）技术是体外酶促合成DNA片段的新方法，其原理类似于DNA的体内半保留复制。主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成。即在高温下（95℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；而后在低温（37~55℃）情况下，两条人式合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链；在Taq酶的最适温度（72℃）下，以引物的3`端为合成的起点，以单核
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