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- 2025年09月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
120
- 英文名：
Diagnostic Kit for Vibrio parahaemolyticus DNA
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
英文名称：Diagnostic Kit for Vibrio parahaemolyticus DNA
本试剂盒适用于检测水样粪便，疑似污染的水、食物等样本中的副溶血性弧菌，用于副溶血性弧菌感染 的辅助诊断，其检测结果仅供参考。
本试剂盒用一对副溶血性弧菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对副溶血性弧菌的 DNA 进行体外扩增检测，用于对可疑感染者的病原学检测。
副溶血性弧菌（VP）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）试剂组成：
| 包装规格 | 50T/盒 |
| VP 反应液 | 500μL×2 管 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| VP 阳性质控品 | 50μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
储存条件及有效期：-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
适用仪器：ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
标本采集：水样便取 0.5~1mL；疑似污染的食物取 1g
保存和运输：上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
使用方法：
1. 样品处理（样本处理区） 1.1 样本前处理 水样便 13000rpm 离心 2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取 0.05g 于研磨器中研磨， 加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；疑似污染的水直接取 100μL 1.2 核酸提取 推荐采用公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请 按照试剂说明书进行操作。 2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N（N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份），每测试反应体系配制如下表： 试剂 VP 反应液 酶液 用量（样本数为 N） 20μL 1μL 将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21μL/管。 3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。 4. PCR 扩增（核酸扩增区） 4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内； 4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL； 荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。 4.3 推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号 1 1 cycle 95℃ 10min 否 2 40 cycles 94℃ 15sec 否 55℃ 30sec 是 5. 结果分析判定 5.1 结果分析条件设定 设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值（一般可在 3~15 范围内调节）、stop 值（一般可在 5~20 范围内调节），以及 Threshold 的 Value 值（上下拖动阈值线至高于阴性对照），重新分析结果。 5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线； 可疑：检测通道 3538 或无 Ct 值。 6. 质控标准 阴性质控品：Ct>38 或无 Ct 值显示； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。 7. 检测方法的局限性 1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关； 2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果； 3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果； 4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果； 5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果； 6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果； 7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
注意事项
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验关键词： 副溶血性弧菌 直接溶血毒素基因原核表达载体 构建 副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)是一种能引起食物中毒和旅游者腹泻的嗜盐性细菌。直接溶血毒素(thermostable direct hemolysin,TDH)是其主要的致病因子。本研究通过构建tdh基因原核表达载体，并实现表达，以获得与天然抗原结构接近的重组抗原。 构建重组质粒tdh/Trc99A经酶切及PCR
应用 一、甲组溶血性链菌的快速检查法 （一）试剂制备 （二）检查方法 二、脑膜炎双球菌的快速检测法 （一）制备荧光抗体 （二）检查方法 二、脑膜炎双球菌的快速检查法 （一）制备荧光抗体 （二）检查方法 三、霍乱弧菌和副霍乱弧菌的快速检查法 四、鼠疫标菌的快速检查法 五、炭疽杆菌的快速检查法 六、致病性大肠杆菌的快速检查法 七、结核杆菌的快速诊断方法 八、其他细菌的快速检查方法 九、钩端螺旋体的检查法 十、梅毒螺旋体的检查法 （一）抗原制备 （二）荧光抗体 （三）间接
、脑膜炎双球菌的快速检测法 （一）制备荧光抗体 （二）检查方法 三、霍乱弧菌和副霍乱弧菌的快速检查法 四、鼠疫标菌的快速检查法 五、炭疽杆菌的快速检查法 六、致病性大肠杆菌的快速检查法 七、结核杆菌的快速诊断方法 八、其他细菌的快速检查方法 九、钩端螺旋体的检查法 十、梅毒螺旋体的检查法 （一）抗原制备 （二）荧光抗体 （三）间接
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