Recombinant E.coli RecA Protei

碧云天生产的Recombinant E.coli RecA Protein，即重组大肠杆菌RecA蛋白，也称E.coli RecA，是碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种大肠杆菌内源性表达的对于DNA损伤修复和紫外诱导的突变过程中的遗传重组起关键作用的酶。RecA的合成是由DNA损伤导致的SOS反应诱导的。RecA具有单链DNA依赖的ATP酶活性，在同源重组反应的过程中，会形成D-loop和Holliday structure；它还具有coprotease活性，并促进LexA抑制子、lambda噬菌体抑制子和UmuD蛋白的自剪切。RecA在真核生物中的同源蛋白是Rad51和Dmc1[1]。E.coli RecA蛋白可用于重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)[2]。

体外研究所必需的表明，在ATP存在的情况下，E.coli RecA蛋白首先与单链DNA结合形成核蛋白丝，核蛋白丝与双链DNA结合形成突触丝，突触丝打开双链体并寻找同源链，之后催化互补链的交换，结合E.coli RecA蛋白的单链DNA与互补链DNA从5′→3′方向进行互补配对最终形成新的异源双链体并发生分叉迁移[3]。

用途：电镜下DNA结构的可视化，D-loop突变，利用E.coli RecA蛋白结合的探针进行DNA文库筛选，在单个指定位点进行DNA酶切，介导全长cDNA克隆的亲和捕获，同源重组机制及SOS反应研究，重组酶聚合酶扩增。

来源：纯化自携带recA基因的E.coli重组菌株。

分子量：约为38kDa。

纯度：纯度≥ 95%，且不含DNA内切酶和外切酶、不含RNA酶、不含磷酸酯酶。

浓度：2mg/ml。

酶储存溶液：10 mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% (v/v) Glycerol, pH7.4 @ 25ºC。

10X RecA Reaction Buffer：700mM Tris-HCl, 100mM MgCl2, 50mM DTT, pH7.6 @ 25ºC。

失活或抑制：65ºC孵育20分钟可使E.coli RecA蛋白失活。

碧云天E.coli RecA蛋白酶活性检测效果参考图1。

图1.碧云天Recombinant E.coli RecA Protein (D7025)活性鉴定结果图。在10µl反应体系中，加入1µl 10X RecA Reaction Buffer、图中指定量的本产品(0-5μg)及5pmol ssDNA (25bp)，随后用超纯水补足至10μl，37ºC孵育30分钟进行充分结合。结合完成后，取10μl反应后产物，加入1µl EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(蓝色, 10X) (GS007)混匀，使用BeyoGel™ EMSA PAGE预制胶(4%, 15孔) (GS306S)进行电泳检测。电泳结束后，在室温下使用NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) (D0128/D0130)染色凝胶20-30分钟，紫外灯下拍照观察实验结果。如图所示，本产品与N公司(Competitor)有相似的单链DNA结合活性。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

包装清单：

保存条件：

-20ºC保存，两年有效。

注意事项：

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。