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- 2025年09月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
123
- 英文名：
Canine parainfluenza virus Detection Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
英文名称：Canine parainfluenza virus Detection Kit
犬副流感是由犬副流感病毒（Canine parainfluenza virus，CPiV）引起的犬的一种以咳嗽、流涕、发热为特征的呼吸道传染病。CPiV 是仔犬咳嗽的病原之一，主要感染幼犬，发病急，传播快。 本试剂盒适用于检测犬鼻拭子、口咽拭子中犬副流感病毒 (CPiV)的 RNA，适用于犬副流感病毒 (CPiV) 的辅助诊断。
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对犬副流感病毒 (CPiV)特异性引物，结合一条特异性探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术副流感病毒 (CPiV)的 RNA 进行体外扩增检测，用于对可疑感染动物的病原学检测。
犬副流感病毒 (CPiV)核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）试剂组成：
| 包装规格 | 25T/盒 | 50T/盒 |
| CPiV 反应液 | 500μL×1 管 | 500μL×2 管 |
| 酶液 | 25μL×1 管 | 50μL×1 管 |
| CPiV 阳性质控品 | 250μL ×1 管 | 250μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 | 250μL ×1 管 |
储存条件及有效期：-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
适用仪器：ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
标本采集：鼻拭子、口咽拭子：取无菌拭子，插入宠物鼻腔或口腔至咽的后部直达喉气管，轻轻擦拭并慢慢旋转 2 圈~3 圈，沾取鼻腔分泌物或气管分泌物取出后放入保存管中。
保存和运输：采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过 3 次。
使用方法：
1. 样本处理（样本处理区） 1.1 样本前处理 拭子样本：将棉拭子样本置于 1.5mL 离心管中；加入 1mL 生理盐水，生理盐水以没过棉签头为宜，浸泡并震荡 1 分钟，离心取上清液用于核酸提取。 1.2 核酸提取 采用商品化试剂盒，按照试剂盒说明书进行操作。 2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N（N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份），每测试反应体系配制如下表： 试剂 CPiV 反应液 酶液 用量（样本数为 N） 19μL 1μL 将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，20μL/管。 3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。 4. PCR 扩增（核酸扩增区） 4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内； 4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL； 荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM，淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。 4.3 推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号 1 1 cycle 50℃ 10min 否 2 1 cycle 95℃ 2min 否 3 45cycles 95℃ 15sec 否 60℃ 30sec 是 5. 结果分析判定 5.1 结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析 ABI7500 仪器为例） 反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用户可根据实际情况自行调整，Start 值可设在 3～15、End 值可设在 5～20，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击 Analyze 自动获得分析结果。 5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线； 阴性：样本检测结果无 Ct 值，且无特异性扩增曲线； 可疑：样本检测结果 40＜Ct 值≤45，建议重复检测，如果检测通道仍为 40
注意事项
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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