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- 2025年11月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
125
- 英文名：
Diagnostic Kit for Infectious Bovine herpesvirus 4 Virus DNA
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
英文名称：Diagnostic Kit for Infectious Bovine herpesvirus 4 Virus DNA
本试剂盒适用于检测牛血样、拭子、精液、动物组织（粘膜、肝、脾、肾、淋巴结、胎盘组织等）等样品 中牛疱疹病毒 4 型病毒感染，用于牛疱疹病毒 4 型感染的辅助诊断。
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对牛疱疹病毒 4 型特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对牛疱疹病毒 4 型的 DNA 进行体外扩增检测，用于对可疑感染病料的病原学检测。
牛疱疹病毒 4 型（BoHV-4）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）试剂组成：
| 包装规格 | 25T/盒 | 50T/盒 |
| BoHV-4 反应液 | 500μL×1 管 | 500μL×2 管 |
| 酶液 | 25μL×1 管 | 50μL×1 管 |
| BoHV-4 阳性质控品 | 250μL ×1 管 | 250μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 | 250μL ×1 管 |
储存条件及有效期：-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
适用仪器：采集牛血样、拭子、精液、动物组织(粘膜、肝、脾、肾、淋巴结、胎盘组织等)等样品。
标本采集：病死或扑杀动物，无菌采集肺病变部位或病变/非病变部位交界处的样品；活动物灭菌棉拭子沾取气管分泌 物，放入无菌试管中
保存和运输：采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过 3 次。
使用方法：
1. 样品处理（样本处理区） 1.1 样本前处理 血清、全血：用无菌注射器或采血专用真空管针无菌自牛静脉采血，无菌分离血清，直接用于核酸提取。 用无菌注射器或采血专用真空管针无菌自牛静脉采血，将血液直接滴入抗凝剂中，并立即连续摇动，充分混合。 抗凝剂采用柠檬酸钠缓冲液，或 0.5mol/L EDTA。每 6mL 血液加 1mL 抗凝剂。直接用于核酸提取。 拭子：用无菌棉拭子采集鼻道、生殖器官和眼分泌物，采集时，将拭子反复刮擦呼吸道或生殖器官粘膜， 蘸取分泌物后，立即将棉拭子浸入 1mL~2mL 灭菌 0.01mol/L pH7.2 的 PBS 中，4℃储存，尽快送达实验室。取样进行检验时，充分振动、挤干拭子，浸泡液采用 4 000 r/min 离心 1 min，取上清备用。 精液：将冷冻精液样品或新鲜精液样品分装到 1.5mL 微量离心管中，充分解冻后，振荡混匀，采用 12 000 r/min 离心 30 s，取上清按 GB/T 27981-2011 中 6.2.1 或 6.2.3 进行核酸提取；或取原液按 6.2.2 或 6.2.3 提取核酸。每 一批次冷冻精液取 3 支冻精管，分别进行核酸提取和后续检测。 组织样品：剖检时无菌采集动物呼吸道粘膜、扁桃腺、肺部和支气管淋巴结，对流产胎儿，采集刚死亡胎儿肝、肺、肾、脾和胎盘组织。检测时，用无菌剪、镊取适量样品，按 1：5 的比例加入灭菌 0.01 mol/L pH7.2 的 PBS（例：1g 组织样品加 5mL 溶液），在研钵中剪碎，充分研磨，取研磨物分装到离心管中，冻融 2 次~3 次， 4 000r/min 离心 5 min，取上清备用[1]。 1.2 核酸提取 推荐采用公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取， 请按照试剂说明书进行操作。 2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表： 试剂 BoHV-4 反应液 酶液 用量 19μL 1μL 将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，20μL/管。 3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。 4. PCR 扩增（核酸扩增区） 4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内； 4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL； 荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。 4.3 推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号 1 1 cycle 95℃ 2min 否 2 45 cycles 95℃ 15sec 否 60℃ 30sec 是 5. 结果分析判定 5.1 结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析 ABI7500 仪器为例） 反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用户可根据实际情况自行调整，Start 值可设在 3～15、End 值可设在 5～20，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击 Analyze 自动获得分析结果。 5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线； 阴性：样本检测结果无 Ct 值，且无特异性扩增曲线； 可疑：样本检测结果 40＜Ct 值≤45，建议重复检测，如果检测通道仍为 40
注意事项
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验厂家 1 乙型肝炎病毒（HBV）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒 达安、匹基、科华 … 2 乙肝病毒核酸荧光定量检测及YMDD变异检测试剂盒
链球菌后血清中的抗体反应。该方法仅需5 μl血清，90 min即完成分析，对链球菌溶血素O（SLO）、DNaseB的测定结果与传统方法100％相符，而且特异、灵敏，可检测浓度1 ng/ml以下的抗体。Kuller［7］直接在微球上交联全病毒抗原，用液相芯片技术检测恒河猴血浆中的抗病毒IgG抗体，以筛选未感染猴D型逆转录病毒、猴T淋巴细胞趋向性病毒、猴疱疹病毒1型、猴免疫缺陷病毒的SPF动物，并与ELISA比较检测灵敏性、特异性、交叉反应性和通量。结果表明，这两种方法的检测结果高度相关（相关系数 r
%～96%，而微球免疫方法能减少人力和试剂消耗，并缩短检测时间。在定量检测方面，国外也有报道。Dias等建立微球免疫方法，用于定量检测抗人乳头瘤病毒6、11、16和18型中和抗原的抗体，并根据检测结果确定用于临床诊断判定的抗体阈值。Lal等建立微球免疫检测方法，用于同时定量检测抗9种血清型肺炎链球菌的IgG抗体，研究表明，微球免疫液相蛋白芯片方法可用于肺炎链球菌疫苗免疫效果的评估。此外，国外还有报道建立液相蛋白芯片方法用于检测艾滋病病毒抗体、疱疹病毒抗体、麻疹和腮腺炎抗体、弓形虫抗体、呼吸
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