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- 2025年11月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
105
- 英文名：
Clostridium novyi Detection Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
英文名称：Clostridium novyi Detection Kit
诺维氏梭菌（Clostridium novyi）曾被称为水肿梭菌（Clostridium oedematiens），诺维氏梭菌无荚膜，有周鞭毛者能运动。猪诺维氏梭菌病是由诺维氏梭菌感染引起的一种高度接触性高度致死性传染性疾病，该种疾病也称为水肿梭菌病，致病原为革兰氏阳性染色的厌氧杆菌。该种致病菌属于极长的大型芽孢杆菌，粗细均匀一致， 两端钝圆，常成单个存在或成对存在，能形成芽孢。在猪只体内会产生非常强的外毒素，从而导致突然死亡。该病发展非常迅速，通常来不及治疗即死亡，严重损害养猪场的经济效益。 本试剂盒适用于检测肝、肾、脾脏和全血等标本中诺维氏梭菌，适用于诺维氏梭菌感染的辅助诊断。
本试剂盒用一对诺维氏梭菌特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术对诺维氏梭菌的 DNA 进行体外扩增检测，用于对可疑感染病料的病原学检测。
诺维氏梭菌（Clostridium novyi）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）试剂组成：
| 包装规格 | 25T/盒 | 50T/盒 |
| Clostridium novyi 反应液 | 500μL×1 管 | 500μL×2 管 |
| 酶液 | 25μL×1 管 | 50μL×1 管 |
| Clostridium novyi 阳性质控品 | 50μL ×1 管 | 50μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 | 250μL ×1 管 |
储存条件及有效期：-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
适用仪器：ABI、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
标本采集：病死或扑杀猪，取肝、肾、脾脏等组织；待检活猪，取血 5mL； 组织样品：取肝、肾、脾脏等组织，置于无菌离心管内备用。血清样品采集：用无菌注射器抽取受检猪静脉 血不少于 5mL，置于无菌离心管内，2000r/min~3000r/min 离心 10min，吸取上清液到新的离心管内备用。
保存和运输：采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过 3 次。
使用方法：
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理 血清样品：无需进行前处理，直接用于核酸提取；组织样品：取 1g 组织，剪碎，加人 2mL 生理盐水进行研磨，制备组织匀浆，8000r/min 离心 5min，取上清用于后续的核酸提取。
1.2 核酸提取 推荐采用公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请 按照试剂说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N（N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份），每测试反应体系配制如下表： 试剂 Clostridium novyi 反应液 酶液 用量 19μL 1μL 将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，20μL/管。
3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光， 选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号 1 1 cycle 95℃ 2min 否 2 45 cycles 95℃ 15sec 否 60℃ 30sec 是
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析 ABI7500 仪器为例） 反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用户可根据实际情况自行调整，Start 值可设在 3～15、End 值可设在 5～20，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击 Analyze 自动获得分析结果。
5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤40，且有明显的指数增长曲线； 阴性：样本检测结果 Ct 值>40 或无 Ct 值。
6. 质控标准 阴性质控品：无特异性扩增曲线或无 CT 值； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数增长期，且Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。 7. 检测方法的局限性 1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关； 2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果； 3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果； 4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果； 5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果； 6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果； 7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
注意事项
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验破伤风梭菌（ clostridium tetani ）是引导起破伤风的病原菌，大量存在于人和动物肠道中，由粪便污染土壤，经伤口感染引起疾病。 破伤风梭菌菌体细长，长 4 ～ 8um ，宽 0.3 ～ 0.5um ，周身鞭毛，芽胞呈圆形，位于菌体顶端，直径比菌体宽大，似鼓槌状，是本菌形态上的特征。繁殖体为革兰氏阳性，带上芽胞的菌体易转为革兰氏阴性。破伤风梭菌为专性厌氧菌，最适生长温度为 37 ℃ ph7.0 ～ 7.5 ，营养要求
酪酸梭菌 酪酸梭菌又称：酪酸杆菌，酪酸菌。拉丁文：Clostridium butyricum.是人的正常肠道菌之一，医学|教育网搜集整理严格厌氧，为革兰阳性菌。由于产生的酪酸又叫丁酸，所以也被称为丁酸梭菌，丁酸杆菌或丁酸菌。本菌存在于土壤、动物和人体的肠道中。
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NEJM 刊登了一篇由荷兰多所研究机构联合发表的，题为 Duodenal Infusion of Donor Feces for Recurrent Clostridium difficile 的论文 [1]。报道了人类历史上第一个使用粪便移植治疗艰难梭菌的随机双盲实验。 图片来源: NEJM 艰难梭菌感染通常采用抗生素治疗，但长久以来的临床证据显示，抗生素疗法的疗效并不尽如人意。与用来治疗艰难梭菌感染的一线药物，万古霉素相比。粪便移植的疗效简直「惊为天人」。传统万古霉素治疗后复发的概率极高，治愈
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