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- 2025年09月04日
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10
- 供应商：
广州市左克生物
- CAS号：
12244-57-4
- 规格：
5mg
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文献和实验gcc19800119 因为一直没有筛选到突变IkBa质粒的稳定转染株，决定用NFkB抑制剂抑制通路后继续做实验。 因为要做体内和体外实验，目前用PDTC，但是有专家提出，PDTC不是特异性的NFkB抑制剂，研究结果可能有偏差，不能很好的说明问题，现在有点犹豫了。 看了专家建议的MECRK产品，关于NFKB的抑制剂也有很多种，有很多也是化学试剂，总觉得也不是特异性的抑制。但是有两种，一种SN50和IKK的多肽片段作为NFKB的抑制剂，不知道有没有
： 1.一定要在lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂，否则即使band压出来也会很浅，结果也不可信。 2.加一抗后最好4度过夜，保证抗体有充分的结合时间。因为磷酸化的蛋白只占总的蛋白量的极少部分。4度也可使一抗重复使用多次。毕竟磷酸化的抗体都挺贵的。二抗则室温1小时即可。 3.磷酸化抗体的好坏是一个关键因素，所以要选择好的厂商。个人认为，Cell signaling公司做的磷酸化抗体不错，尤其是MAPKs磷酸化抗体。
相关专题磷酸化蛋白的Western Blotting检测是信号通路研究中的经典方法。然而，有时会遇到一些问题，例如，磷酸化抗体检测不到总蛋白，不知道如何使用lysis buffer，Western blot高背景等。本文总结了论坛上的高手整理的实验操作需注意事项，供各位迷途羔羊参考。1. 一定要在lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂，否则即使band压出来也会很浅，结果也不可信。附：lysis buffer配方&NBSp;Buffer&NBSp;&NBSp
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