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文献和实验from HeLa in 5 μl of Buffer C; incubate on ice for 30 min. (Monoclonal antibody does not disturb HSF1-DNA binding activity.) Following steps are the same as normal gel shift: 3. Add reaction mix containing 1-10 fmol (~0.1 ng) of 32P-labeled
所不能替代的,如限制性酶切片段的多态性 (RFLP) 的检测等。一、基因组 DNA 的制备(前述)二、基因组 DNA 的限制酶切根据实验目的决定酶切 DNA 的量。一般 Southern 杂交每一个电泳通道需要 10-30 μg 的 DNA。购买的限制性内切酶都附有相对应的 10 倍浓度缓冲液,并可从该公司的产品目录上查到最佳消化温度。为保证消化完全,一般用 2-4 U 的酶消化 1 μg 的 DNA。消化的 DNA 浓度不宜太高,以 0.5 μg/μl 为好。由于内切酶是保存在 50% 甘油
Transformation of E. coli by Electroporation
dry the pellet. 6. Resuspend the DNA in 0.5X TE buffer [5 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA (pH 7.5)] to a concentration of 10 ng/ul of DNA. Use 1 μl per transformation of 20 μl of cell suspension. III. Electroporation. 1. Mark the required
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