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- 2026年03月04日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
130
- 英文名：
Streptococcus Suis Detection Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
英文名称：Streptococcus Suis Detection Kit
猪链球菌（Streptococcus suis）是一种重要的人畜共患病病原体，可引起多种疾病，包括脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症、肺炎等。根据细菌的荚膜多糖抗原可降之分为 35 个血清型，即 1~34 型和 1/2 型。本试剂盒适用于检测扁桃体、内脏或肌肉、咽拭子等样本中的猪链球菌通用型，用于猪链球菌通用型感染的辅助检测。
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对猪链球菌通用型特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对猪链球菌通用型的 DNA 进行体外扩增检测，用于对可疑感染病料的病原学检测。
猪链球菌通用型（SS-U）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）试剂组成：
| 包装规格 | 50T/盒 | |
| SS-U 反应液 | 500μL×2 管 | |
| 酶液 | 50μL×1 管 | |
| SS-U 阳性质控品 | 50μL ×1 管 | |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
储存条件及有效期：-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
适用仪器：ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
标本采集：扁桃体、内脏或肌肉样品采集：用无菌的剪刀和镊子剪取待检样品 1.0g 于研钵中充分研磨，再加 5mLPBS 混匀，然后将组织悬液转入无菌离心管中编号备用。 生猪拭子样品采集：咽喉拭子采样，采样时要将拭子深入喉头及上颚来回刮 3 次~5 次，取咽喉分泌液。其他样品采集可参考GB/T 19915.7-2005 采集方法。
保存和运输：采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过 3 次。
使用方法：
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理 扁桃体、内脏或肌肉样品：用无菌的剪刀和镊子剪取待检样品 1.0g 于研钵中充分研磨，再加 5mLPBS 混匀， 然后将组织悬液转入无菌离心管中编号备用。生猪拭子样品：咽喉拭子采样，采样时要将拭子深入喉头及上颚来回刮 3 次~5 次，取咽喉分泌液备用。其他样品前处理可参考 GB/T 19915.7-2005。
1.2 核酸提取 推荐采用公司生产的核酸提取试剂（离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表： 试剂 SS-U 反应液 酶液 用量 19μL 1μL 将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，20μL/管。
3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL； 荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号 1 1 cycle 95℃ 2min 否 2 45 cycles 95℃ 15sec 否 60℃ 30sec 是 5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析 ABI7500 仪器为例） 反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用户可根据实际情况自行调整，Start 值可设在 3～15、End 值可设在 5～20，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击 Analyze 自动获得分析结果。
5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线； 阴性：样本检测结果 Ct 值>40 或无 Ct 值。
5.3 质控标准 阴性质控品：无特异性扩增曲线或无 Ct 值显示； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数增长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
6. 检测方法的局限性
1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
注意事项
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功
总的说来，荧光检测技术可大致分为两大类：通用型的荧光染料检测法和高特异性的荧光探针法。 前者主要是利用荧光染料(如SYBR Green I)与双链DNA分子结合发光的特性来指示扩增产物的增加，优点是：无需另外设计荧光探针 ，无需特别优化条件，简便易行，成本较低，能适用于任何一款定量 PCR 仪，缺点是专一性不如探针法； 而后者则利用荧光标记的特异性探针或者引物来识别模版，优点是特异性更高，适用于扩增序列专一检测(见下表)，不过增加了荧光探针的成本。
光检测仪器透过PCR管壁能直接检测到荧光信号的波长和长度变化。 主要有以下优点： 1、探针特异性强，假阳性率低； 2、操作快速，不需要PCR后处理； 3、定量范围宽，HBV 0.4fg-4000fg/ml(102-106 Dane′s particle/ml)； 4、闭管操作，PCR产物污染少； 5、灵敏度高。 主要方法有： 1、荧光探针法：进行荧光PCR检测时，要求荧光探针必须完全与靶基因互补，长度以20-30个碱基为宜，必要时3′端磷酸化封闭，以防在扩增时作为引物延伸。该方法利用Taq
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