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文献和实验NaHCO3 浓度的 Earle's 平衡盐溶液,并且由培养箱维持 5~10% CO2。通常,1.2~2.2g/L NaHCO3 配合 5% CO2,3.7 g/L NaHCO3 配合 10% CO2。精确的计量因培养基配方而不同。除了 Leibovitz's L-15 (ATCC No.30-2008),ATCC 所有培养基都要匹配 5% CO2。绝大多数 ATCC 培养基含 1.5g/L NaHCO3 以及额外的丙酮酸钠。而 Gibco Hyclone 很多品牌的培养基里都含有 3.7 g/L
和 p53 的低水平表达。培养液:MEM(含 2 mM L - 谷氨酰胺和 Earle's BSS,1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸,1.0 mM 丙酮酸钠), 10% 胎牛血清传代:吸去培养液。用 0.25%(w/v)Trypsin- 0.53 mM EDTA 洗一次,以去除血清(血清会抑制胰酶活性)。加 2 - 3 毫升 Trypein-EDTA,放 37℃ 培养箱内约 5 分钟,直到细胞全部脱落。加 6 - 8 毫升培养液,用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中
有Ca2+、Mg2+,因此D-Hank"s常用于配制胰酶溶液。Earle平衡液含有较高的NaHCO3(2.2g/L),适合于5%CO2的培养条件,Hank"s平衡液仅含有0.35g/L NaHCO3,不能用于5%CO2的环境,若放入CO2培养相,溶液将迅速变酸,使用时应注意。 配制溶液应使用双蒸水或去离子水。如果配方中含有Ca2+、Mg2+,应当首先溶解这些成分。配好的平衡盐溶液可以过滤除菌或高温灭菌。 二、消化液:取材进行原代培养时常常需要将组织块消
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