- ￥100
- 中国
- 2026年04月21日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
载基生物
- 规格：
白光检测/荧光检测
| 规格： | 白光检测 | 产品价格： | ￥100.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 荧光检测 | 产品价格： | ￥100.0 |
▶ 服务介绍
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。
▶ 实验流程
石蜡切片→脱蜡至水→修复→破膜→阻断内源性过氧化物酶→加反应液→显色→复染细胞核→封片镜检
客户提供：新鲜样本/固定后的样本/包埋后的蜡块/切片，新鲜样本干冰运输；固定液样本、蜡块常温运输；石蜡切片、细胞爬片冰袋运输；冰冻切片冰袋+干冰运输。
▶ 实验步骤
1.蛋白酶 K 修复：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止液体流走），在圈内滴加蛋白酶 K 工作液覆盖组织，37 度温箱孵育 20min。将玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。(蛋白酶 K 工作液配置方法，原液：PBS=1:9)
2.（可选步骤）破膜：切片稍甩干后在圈内滴加破膜工作液覆盖组织，常温下孵育 20min，将玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。
3.阻断内源性过氧化物酶：将玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。在圈内滴加内源性过氧化物酶阻断剂，室温避光孵育 20 min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。
4.室温平衡：切片稍甩干后在圈内滴加 buffer 覆盖组织，buffer 常温孵育 10min。
5.加反应液： 去掉平衡液，按片子数量和组织大小取 tunel 试剂盒内适量 RecombinantTdT enzyme，Biotin-dUTP Labeling Mix，Equilibration Buffer，按 1 μL：5 μL：50 μL 比例混合，加到圈内覆盖组织，切片平放于湿盒内，37℃温箱孵育 1 小时，湿盒内加少量水保持湿度。
6.加 Streptavidin-HRP 反应液：将玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3次，每次 5min。 Streptavidin-HRP 和 TBST 按 1：200 比例混合，加到圈内覆盖组织，切片平放于湿盒内，37℃温箱孵育 30min。将玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。
7.DAB 显色：切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的 DAB 显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为细胞核呈棕黄色，纯水冲洗切片终止显色。
8.复染细胞核：苏木素复染 6min 左右，自来水洗，1%盐酸酒精分化 1-2 秒，自来水洗，1%氨 水返蓝，自来水洗。
9.脱水透明封片：将切片依次放入 65%乙醇 1min-75%乙醇 1min-85%乙醇 1min -95%乙醇-无水乙醇 1min -二甲苯Ⅰ 5min 中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。
10.结果观察：苏木素染细胞核为蓝色，DAB 显出来的阳性凋亡细胞核为棕黄色。
▶ 结果展示
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文献和实验一、TUNEL法的实验原理 细胞发生凋亡时, 染色体DNA双链或单链断裂产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖
Detection of apoptotic process in situ using immunocytochemical and TUNEL assays
, however, can not provide information regarding the histological localization at single cell level. This can be done by immunocytochemical method (A) or by enzymatic in situ labeling of apoptosis-induced DNA strand breaks (TUNEL) (B). Apoptosis was observed
PROTOCOL: •Deparaffinize and rehydrate slides: 3 x 3´ Xylene 3 x 2´ 100% ethanol 1 x 2´ 95%, 80%, 70% ethanol (each) 1 x 5´ 1x PBS •Microwave antigen retrieval: 4 x 5´ in microwave (600 ml of 10mM NaCitrate, pH 6) Cool 20
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