番红-固绿染色

▶ 服务介绍
     番红固绿染色是一种用于观察植物组织不同组织形态的染色方法。在番红固绿染色中，番红主要用于染细胞核、木质化和木栓化的细胞壁，呈现红色；固绿则使纤维素细胞壁和导管呈现绿色，筛管染成绿色。实验步骤包括石蜡切片脱蜡、番红和固绿染色、脱色、再染色、封片及显微镜镜检等过程。

▶ 实验仪器与试剂

▶ 实验步骤

1.关节组织经过 4-10 倍体积的 4%多聚 甲醛固定 24 小时后，依据取材部位和要求，将组织修薄为 2-3mm（最佳），放入包埋盒中写上标签。
2.脱水浸蜡：将装有组织的包埋盒放入自动脱水机中进行脱水。75%酒精 3h，85%酒精 1h，95%酒精Ⅰ1h，95%酒精Ⅱ1h，无水乙醇Ⅰ20min，无水乙醇Ⅱ20min，无水乙醇+二甲苯（1:1 混合）1h，二甲苯Ⅰ30min，二甲苯Ⅱ30min，石蜡Ⅰ30min，石蜡Ⅱ30min，石蜡 III1h。
3.包埋：将浸好蜡的组织于包埋机中进行包埋。在包埋模具中加入少量蜡液，将组织从包埋盒中取出，按照包埋面的要求放入包埋模具中，转移至-20 度冻台冷却至组织固定在包埋模具底部，盖上包埋盒盖子，再添加适量蜡液，最后转移到-20 度冻台冷却脱模。
4.石蜡切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机切片，厚 4μm。切片漂浮于摊片机45℃ 温水上将组织展平，载玻片将组织捞起，60℃ 烘箱内烤片。水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
5.依次将切片放入二甲苯Ⅰ 5min-二甲苯Ⅱ 5min-二甲苯 III5min-无水乙醇 1min-95%酒精 1min-85%酒精 1min-75%酒精 1min-65%酒精 1min，自来水洗。
6.使用酸性分化液分化 15 秒，用流水冲洗 5 分钟。
7.滴加固绿染色液，染色 5 分钟，用蒸馏水洗涤。
8.快速使用弱酸溶液洗涤切片 10-15 秒，以去除残留的固绿染料，再次用蒸馏水洗涤。
9.入番红 O 染液内浸染，时间通常为 15-30 秒至 1-2 小时，用蒸馏水洗去多余染料。
10.无水乙醇脱水两次，每次 5 分钟。
11.二甲苯透明两次，每次 5 分钟。
12.在石蜡切片的中央滴加一滴中性树胶，盖上盖玻片封固。
13.在显微镜下观察并拍照，评估软骨和骨组织的染色