T4 polynucleotide kinase【T4多核苷

多核苷酸激酶 polynucleotide kinase

　　由 T偶数噬菌体所感染的大肠杆菌分离出来的酶，能催化 ATP的γ -磷酸转移到 DNA或 RNA的 5′ -OH末端生成 ADP的反应。 EC2． 7． 1． 78。因为此酶的催化反应特异性很高，可用 32 P标记的 ATP特异地标记多核苷酸的 5′末端。广泛应用于多核苷酸的链长的测定和 5′末端核苷酸排列的确定等核酸结构的研究。  

T4多核苷酸激酶末端标记

  用 T4 标记的 5’ 末端 1． 无菌的 1.5ml 为了离心管置冰浴上顺序混合下列组分： 50 pmol 合成的寡核苷酸 2.5 μ l 10 ×反应缓冲液 10 μ l γ -[32 P]ATP （ 33pmol ） 1.5 μ l T4 多核苷酸激酶（ 15U ） 灭菌双蒸水加至 25 μ l 2． 37 ℃温育 30min 。 3． 当反应物正温育时，以 2000 × g 离心 2min 制备

用T4噬菌体多核苷酸激酶标记寡核苷酸探针

。在这些情况下，仅有约10％的放射性标记物被转移，但实际上每个寡核苷酸分子都被标记。         2） 在反应混合液中加入8单位（约1 μl）T4噬菌体多核苷酸激酶。 充分混匀，于37 ℃温育45分钟。人该反应液中另取0.5 μl 加至另一装有10 10mmol/LTris.Cl(pH8.0)的反应管中，搁置一旁留备步骤3）使用。于68 ℃将其余的反应液加热10分钟，以灭活T4噬菌体多核苷酸激酶。         3） 按下列方法（Stawinski等，1977;Narang等，1980