PI-SceI

产品描述：

归位内切酶，识别位点：ATCTATGTCGGGTGCGGAGAAAGAGGTAATGAAATGG (-22/-26)，编码 PI-SceI 的内含肽基因存在于酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的 VMA-ATP 酶基因中（1,5）。该基因经过修饰可在大肠杆菌中用 T7 RNA 聚合酶表达系统进行独立表达（2）。

产品用途：限制性酶消化

运输和储存：-20℃保存，于-20 ~ 0℃运输。▲避免反复冻融。

产品信息：

货号：Ubri-PI-SceI01

规格：250 units

纯度：SDS-PAGE检测无杂带（>99%)

酶活鉴定：酶切完全后琼脂糖电泳鉴定

本产品提供以下试剂或组分：

单位定义：一个单位是指在 50 μl 的总反应体系中，37℃ 条件下，3 小时内酶切 1 μg 对照质粒所需酶量。

使用方法：

1. 反应体系配置（50 μL标准体系）

组分	用量	终浓度
DNA底物	1 μg	-
PI-SceI	0.5–1 μL (5–10 U)	100–200 U/mL
10×Reaction Buffer01	5 μL	1×
Nuclease-free Water	补足至50 μL	-

2. 将上述反应置于37℃孵育3h以上。

*，根据需要调整。在一般情况下，每微克DNA，我们需要5-10U的酶。酶体积不应超过总反应体积的10%，以防止由于过量的甘油引起的星状活性。对于难消化的质粒，可进行过夜消化。

注意事项：

3.  随酶提供对照质粒 DNA：浓度为 0.5 mg/ml。PI-SceI 酶切该质粒（5781bp）后产生 3929 bp 和 1852 bp 的片段（见酶活鉴定样图）

4. 归位内切酶不具有限制性内切酶那样严格定义的识别序列。因此，单个碱基的改变并不影响其识别功能，但是会不同程度地降低酶切效率。识别序列中必需碱基的准确区域还不确定。列出的识别序列是已知可识别并酶切的位点。

5. PI-SceI 在酶切后仍能与 DNA 结合，并改变 DNA 的电泳迁移率。可在电泳前添加终浓度为 0.5% 的 SDS 或纯化 DNA，以分离酶与 DNA。

热失活：

65℃，20min

保质期：

-20℃保存，2年。

冷冻敏感性：

请勿反复冻融。

光敏感性：

尽量避免室内光线照射。 避免暴露在直射的阳光和紫外线下。