大肠杆菌Nissle1917基因组DNA BNCC37048

具有代表性的新一代DNA测序仪

测序技术工作流程图。 （a）高通量鸟枪Sanger测序法。首先基因组DNA被随机切割成小片段分子，接着众多小片段DNA被克隆入质粒载 体，随后转化到大肠杆菌中。最后培养大肠杆菌提取质粒，进行测序。每一个测序反应都在只有几微升的反应体系中 完成。测序后获得一系列长短不一的末端标记有荧光的片段，最后通过对每一个延伸反应产物末端荧光颜色进行识 别来读取DNA序列。（b）鸟枪循环芯片测序法。首先将基因组DNA随机分割成小片段DNA分子，然后在这些小片段 DNA分子的末端连接上普通的接头，最后用这些小片段DNA分子制成

基因克隆的几种常用方法

。 图6　phage display克隆基因示意图 Phage　display的基本操作过程为:(1)提取某一病原体基因组DNA，用超声波将DNA切割成500～1 500的片段;(2)将片段末端用T4DNA聚合酶处理后，与载体DNA(phagemid)连接形成噬菌体质粒。用这些质粒与辅助噬菌体(helper　phage)同时转染大肠杆菌。phagemid在大肠杆菌内包装成噬菌体，大量繁殖，同时将插入的外源基因片段表达，表达产物主要集中在噬菌体颗粒的表面；(3)将特定的受体

如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准

荧光定量PCR（Real-time PCR）是目前基因表达定量分析的重要检测手段，已经为越来越多的研究者所采用。“好的开始是成功的一半”，Perrez-Novo等(Perrez-Novo et al., 2005)曾报道获得高质量RNA对后续PCR定量结果的准确性是非常重要的，而高质量RNA是获得高质量cDNA的必要条件，所以本文着重介绍一下如何获得高质量cDNA。 高质量cDNA应具备以下几个特点：无基因组DNA残留、能准确反应出样本真实的转录情况和信息完整且浓度适当等特点。