小鼠胆管类器官培养基套装 （扩增）

「谁」动了我的扩增曲线？

各位老师在做荧光定量 PCR 实验的时候，是否遇到过非标准「S」型曲线的问题呢？俗话说的好，完美的 PCR 扩增曲线「千篇一律」，而有问题的 PCR 扩增曲线则是「千姿百态」。今天给大家分享一个案例：客户反映做绝对定量过程中，扩增曲线在线性增长期出现荧光信号突然下降的情况，在多组分图（Multicomponent Plot）中查看原始信号采集情况时，这种现象更加明显。 图 1. 实验数据多组分图（MulticomponentPlot） 好好的扩增曲线怎么就突然「不走寻常路」了，到底是「谁」动

PCR 基因扩增原理与步骤大解析

一、实验概要 PCR 扩增目标 DNA 片段。 二、实验原理 多聚酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）基本原理类似于 DNA 的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR 由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。 1. 模板 DNA 的变性：模板 DNA 经加热至 93℃ 左右一定时间后，使模板 DNA 双链或经 PCR 扩增形成的双链 DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； 2. 模板 DNA 与引物

扩增曲线异常可能涉及到哪些原因？

主要可以归结为以下 6 种： （1）扩增曲线不光滑 主要有两个原因： 一是扩增信号太弱，经系统矫正后，就产生这样抖啊抖的线，小编建议大家提高模板浓度重复实验。二是仪器本身的问题，可能在扩增过程中仪器出现了波动或者本身该检测孔出现了异常。 （2）扩增曲线断裂或下滑 比较典型的曲线下滑如上图所示，主要原因是模板浓度太高了，在基线期内就起峰了，仪器会默认起峰的线条仍为基线部分，将扩增曲线往基线位置下拉，因此你的曲线就趴下来啦～ 这种情况大家也不要慌，可以减小基线终点