新型乳剂(佐剂)

产品详情 新型乳剂是一种具有自主知识产权、独特配方的新型油包水佐剂，用于免疫小鼠和家兔等实验动物以制备单、多克隆抗体。该佐剂以弗氏不完全佐剂为基础，添加了多种具有强免疫刺激活性的 TLR 配体。该佐剂与常规使用的弗氏佐剂相比，具有（1）佐剂活性强于弗氏不完全佐剂；（2）与弗氏完全佐剂不同，不含有干扰免疫应答的无关蛋白成分；（3）安全性好，副反应率低；（4）免疫针次少、抗原用量低等多方面优点。 使用方法 1.用生理盐水将抗原稀释到2倍最终浓度（按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl用量配制）。备注：推荐使用的抗原用量为小鼠每针次10-20μg、家兔每针次20-50μg。 2.乳化：无菌条件下取出所需用量（按小鼠每针次 50μl、家兔每针次100μl）与抗原按体积比1:1混合乳化，至形成白色油包水的乳浊液状态（鉴定方法：滴一滴乳浊液在常温水面上，若凝聚不散开或散开缓慢，成滴状浮于水面，即乳化完全，为合格的油包水剂）。 乳化方式有以下几种： a.机械Vortex法：抗原和佐剂放置于合适的EP管中，使用枪头反复吹打混合后，放在旋涡混匀仪上剧烈振荡乳化5-30min以上, 直至形成粘稠的乳剂为止。备注：乳化过程中仪器会放热，因此可以将整个操作系统放置于4℃条件下进行。 b.手动注射器混合法： i.将等量的佐剂和抗原溶液在EP管中，枪头反复吹打混合，随后转移至一个注射器内，安装针头，针管有助于乳液的形成，用力上下抽吸，乳化30-60min以上，直到形成稳定的乳液。备注：此操作过程中注意防脱针及个人安全。 ii.将等量的佐剂和抗原溶液在EP管中，枪头反复吹打混合，随后转移至一个注射器内，利用三通阀等将其与另一个注射器连接，注意排净空气，将抗原和佐剂在两个注射器中交替推动，乳化30-60min以上，直至形成粘稠的乳剂并很难推动为止。备注：此操作过程中注意漏液。 iii.机械搅拌法：抗原和佐剂放置于合适的EP管中，将佐剂乳化器（货号: BDYQ1001）搅拌头置于混合液的中上部打开开关，然后用自上而下慢慢搅拌佐剂入抗原层，慢慢下移，随后根据乳化的程度，可局部上下摆动前进，最终达到溶液底部完成乳化。博奥龙佐剂乳化器能够轻松解决佐剂与抗原的乳化过程，一般1-10ml乳化量3-5min即可，最多不超过10min。 iv.研磨法：取适量佐剂放入无菌的研钵，缓慢滴加等体积的抗原溶液，边滴边按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。注意：本方法适用于大量制备，缺点是研钵壁上易粘附大量乳剂，抗原损失较大。 v.超声法：使用配有小探头的超声波设备将抗原和佐剂的混合物进行超声处理。超声波的能量有助于打破抗原和佐剂的界面，使其均匀乳化。这种方法适用于一些难以乳化的样品，但是要控制超声频率、时间和温度，超声容易激发一些自由基，对抗原有未知损害。 vi.通过皮下或肌肉单点注射免疫动物，小鼠每针次100μl，家兔每针次200μl。 备注：（1）佐剂与抗原混合后应尽快注射，若放置时间较长出现水油相分层，则必须按上述步骤 2重新混匀；（2）抽入针管前应摇匀，抽入针管后应尽快注射；（3）尽量选择引流淋巴结附近（如腋窝和腹股沟附近）的皮下 或肌肉进行免疫。 vii.第21天按同样方式加强免疫1针。备注：每次佐剂和抗原现配现用。 viii.第35天采微量血进行ELISA测定，抗体滴度应在1:10000-1:10000000 范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免疫和脾细胞融合。 ix.若抗体滴度没有达到要求，可在第42天按同样方式加强免疫1针。备注：通常情况下小鼠只需免疫2针，而家兔往往需要免疫3针。 若免疫3针，可在第52-56天采微量血进行ELISA测定，抗体滴度应在1:10000-1:1000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免疫和脾细胞融合。备注：佐剂免疫效果有时也与抗原特性有关， 若免疫3针后仍达不到要求，不建议进行更多针次免疫。