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- 文献和实验
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RT
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99
- 供应商:
联硕生物
- 规格:
500ml
纯度:0.2mol/L,pH9.5
保存温度:RT
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文献和实验加入适量红细胞裂解液裂解红细胞(可加入 500 μL 1× 红细胞裂解液重悬细胞,室温裂解 2 min 后,立马加入 10 mL PBS,300 g 离心 5 min 后弃上清)。 若提取的腹腔巨噬细胞需培养,请注意无菌操作。 收集腹水时,从小鼠左侧(肠道较多)注射 PBS,从右侧(器脏较大)抽腹腔灌洗液,注意不要扎到器脏。 小鼠腹腔灌洗液收集细胞比较脆弱,加细胞染色缓冲液有利于细胞的保存,但建议当天及时检测。 小鼠腹腔灌洗液中大多数为巨噬细胞,巨噬细胞检测需要封闭Fc受体,此时可使用小鼠 CD16/32纯
)配制浓度至少为1 ~3mg/ml 如果在抗体储存过程中添加叠氮钠,则必须在硼酸盐缓冲液中充分透析去除叠氮钠。 3.按25~100μg/mg将生物素酯加入抗体,在室温下均匀混合孵化4h。在完成组合反应之前DMSO最终浓度不得低于5 %,否则生物素酯会沉淀。高浓度的生物素酯会导致体上结合多个生物素分子,因此所有抗体都可能被标记。较低的比例将使生物素化保持在最低限度(25μg生物素酯/mg摩尔比最初是抗体10:1)。 4.每250μg添加生物素酯20μl1mol/L氯化铵,室温孵化10min
至400 ml,用200mol/L盐酸溶液调节PH值至 7.4滤过,即得。 巴比妥缓冲液(PH8.6) 取巴比妥5.52 g与巴比妥钠30.9 g,加水使溶解成2000 ml,即得。 巴比妥―氯化钠缓冲液(PH7.8) 取巴比妥钠5.05 g,加氯化钠3.7 g及水适量溶解,另取明胶0.5 g加水适量,加热溶解 后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L盐酸溶液调节PH值至7.8,再加水稀释至500 ml即得。 甲酸钠缓冲液(PH3.3) 取2mol/L甲酸溶液25 ml,加酚酞指示
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