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文献和实验污染不除,实验结果势必或多或少产生偏差,故进行实验前,确定细胞为mycoplasma-free至关重要,实验结果之数据才有意义。 支原体污染一般来源于血清,实验仪器、培养基或其他试剂蔓延开来。怎样预防和去除支原体污染呢?一般只有三种抗生素(四环素,大环内脂和喹诺酮)能有效对付支原体。在低浓度时,这些抗生素不会产生耐药性,且对哺乳动物细胞的毒性较小。四环素和大环内酯能结合30S和50S核糖体亚基,从而抑制蛋白质合成,喹诺酮抑制DNA旋转酶。因此可以在细菌DNA复制及蛋白质合成两个层面上抑制
一、原理: 利用荧光染料(bisbenzimide,Hoechst 33258)检测支原体污染。这种染料会结合到DNA的A-T富集区域,因为支原体的DNA中A-T含量高(55%~80%),所以可将其染色而被检测到。被支原体污染的细胞经染色后在细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点,即为支原体的DNA染色斑,说明有支原体污染。 二、试剂盒组分 :
密度为1~2*104。同时,接种正常无支原体感染的同种细胞,作为阴性对照。 2、5天后,先吸去培养液,再加入1ml的固定液,静置20min, 3、吸去固定液,风干10min。 4、于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(注:Hoechst33258工作液须覆盖全部被检细胞),37℃,15~20min(或室温静置20~30min)。 5、吸去Hoechst33258工作液,直接风干。风干后加入一滴封固液,并以盖玻片覆盖。 6、用100-400x荧光显微镜观察。打开汞灯
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