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RT,6个月
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99
- 供应商:
联硕生物
- 规格:
100ml
纯度:0.02%亚甲蓝(0.3M乙酸钠缓冲液)
保存温度:RT,6个月
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文献和实验科镊子提起腹膜,用 5mL 注射器往小鼠腹腔注射 2.5mL 预冷 PBS(勿扎到脏器),轻揉小鼠腹部1~2 min。注射器回抽腹腔灌洗液,收集于15mL 离心管中。 重复第 5 步 5 次,冲洗腹腔,可观察到冲洗液逐渐澄清。 将收集的腹腔灌洗液 300 g 离心 5 min,弃上清。 用细胞染色缓冲液或者含 10% 胎牛血清的 1640 培养液重悬细胞。 进行细胞计数,并调整细胞浓度至 1×107/mL。 注意事项: 若第 7 步离心弃上清后发现细胞沉淀中有较多红细胞,且检测目的细胞非红细胞,先
在 DMF 中稳定,因此,可以用 100 mL DMF 溶解 0.4 g AEC 作为贮存液备用; (2) 加 l mL AEC 溶液 至 15 mL 0.1 mol/L 的乙酸钠缓冲液(pH5.2)中,并搅拌; (3) 加 0.15 mL 3% 过氧化氢于水中。过氧化氢一般是 30% 的溶液提供,在 4℃ 可存放 1 个月; (4) 用滤纸过滤; (5) 加此溶液到标本中,并于室温孵育 10~40 min,水洗终止反应; (6) 优化:如果需要复染,只可用水溶性染料; (7) 用 Gelvatol
基或者 PBS 稀释,再用 200 目筛网,除去残留的组织块,并使用5~10倍体积的 1640 基础培养基或者 PBS 缓冲液洗涤一次,过滤至无组织块为止,获得单细胞悬液。 收集细胞悬液,300 g离心5 min,弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬细胞,并调整细胞浓度至 1×107/mL。 研磨法 提前准备好 200 目的一次性细胞筛网,用 1640 基础培养基或者 PBS 润湿并浸泡备用(浸泡放置于 6 cm 细胞培养皿或者 6 孔板)。 将剥离的肿瘤组织转移到 200 目的细胞筛网,用无菌眼科
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