PAGE非变性蛋白上样缓冲液(5×)，AB63855-5ml

关于论坛中所有Native PAGE/非变性电泳及蛋白回收的经典总结

菌体加4×上样缓冲液煮沸, 12.5% SDS PAGE 分析。 大量表达时, 于1 L 4×YT培养基中摇至A600=0.5～2.0时, 加IPTG(终浓度0.5 mmol/L)诱导1～4 h。 超声破菌, 12 000 g离心除去细菌碎片后, 裂菌上清液用GST亲和树脂纯化(参照BD Biosciences Clontech 使用手册p1-15), 纯化融合蛋白质GST-S600经凝血酶切, 酶切条件为： 1×PBS, 室温反应16 h。 酶切后样品经制备型PAGE电泳分离, 用KCl染色

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)原理、方法步骤与常见问题分析

等生物大分子的生物活性，对于生物大分子的鉴定有重要意义，其方法是在凝胶上进行两份相同样品的电泳，电泳后将凝胶切成两半，一半用于活性染色，对某个特定的生物大分子进行鉴定，另一半用于所有样品的染色，以分析样品中各种生物大分子的种类和含量。 实验方法 非变性聚丙烯酰胺凝胶和变性sds-page电泳在操作上基本上是相同的，只是非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制和电泳缓冲液中不能含有变性剂如SDS等。 一般蛋白进行非变性凝胶电泳要先分清是碱性还是酸性

免疫共沉淀实验指南

电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集