M9基本培养基(无菌)，AB63688-500ml

细胞培养基本技术概述

体积会增加约10%，必须预留此膨胀体积之空间，否则易发生污染或容器冻裂之情形。 2. 一般厂商提供之血清为无菌，不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养基内一起过滤，勿直接过滤血清。 3. 瓶装（500ml） 血清解冻步骤（逐步解冻法）：-20 ℃ 或-70 ℃ 至4 ℃冰箱溶解一天，至室温下全溶后再分装，一般以50ml无菌离心管可分装40～45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变

细胞培养基本技术

的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。 细胞冻存方法 1、预先配制冻存液：含20%血清培养基，10%DMSO，DMSO液用培养液配好，避免因临时配制产热而伤害细胞； 2、取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液,用吸管吹打制成细胞悬液（1×106 ～ 5 ×106细胞/ml)； 3、加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。细胞复苏方法 （1）从液氮中取出冷冻管，迅速投入37～

无菌室使用规则

1分钟后再缓慢倾倒。倒完废液后须令水龙头持续放水1分钟后再行关闭。不须灭菌的塑料袋请集中后置于洗涤室。玻璃、Tips及Flask等亦请分类包扎后送往洗涤室处理。并于外包装上注名无菌室字样。Water Bath 请使用一次水，并须添加抗霉菌剂（Sanitizer 1 稀释500倍）。每周请以2 L清水加10 ml 10% 稀释的漂白水拖地。每周请以70% 酒精清洁擦拭 CO2 培养箱内侧及铁架，并于水盘中加入含抗霉菌剂（Sanitizer 1 稀释500倍）之一次水。CO2 或瓦斯桶若有更换，请于工作