pCDH-CMV-MCS-t2A-copGFP cDNA C

mRNA差异显示技术在肿瘤研究中的应用

无关差异，仅使所关注的表型（如肿瘤细胞的转移潜能）具有显著差异。差异显示从表型差异入手，通过展示mRNA的差异深入到基因差异，克隆与表型差异高度相关的新基因。就技术而言，差异显示巧妙地结合了两个基本的分子生物技术：逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及电泳。经过不断的改良，差异显示已成为标准化的cDNA克隆方法，有多个公司的试剂盒及设备使研究者可在短时间内启动差异显示，几天内获得结果。较其他克隆新基因的方法而言，差异显示具有简便易行的优势，因此在基础和临床研究中有着推广和普及的可能性。一、技术

聚合酶链反应（PCR）技术的发展和应用

扩增，从而使mRNA的PCR步骤更为简化，所需样品量减少到最低限度，临床小样品的检测非常有利。用一步法扩增可检测出总RNA中小于1ng的低丰度mRNA。该法还可用于低丰度mRNA的cDNA文库的构建及特异cD－NA的克隆，并有可能与Taq酶的测序技术相组合，使得自动反转录、基因扩增与基因转录产物的测序在一个试管中进行。 　　最近Cetus公司推出rTth逆转录酶，兼具有DNA多聚酶的活性，对于RNA的发展起了很大的推动作用。有关rTth逆转录酶法参考第四节　有关内容。 　　十一、定量PCR 　

关于论坛中所有Native PAGE/非变性电泳及蛋白回收的经典总结

化钠、甘油和硫还原试剂如DTT的存在也将对酶的活性恢复有利；6）疏水蛋白质恢复活性时，必须用无离子去污剂或两性离子去污剂替代SDS，以保持蛋白质的可溶性。其他实验室经验1，在凝胶中复性是可以做到的。用2.5％triton x-100 洗脱45分钟X2，即可将SDS洗脱出来。可以试一试。先回收再复性的方法不太清楚。2，有的蛋白可以复性，方法是用将胶在2.5％triton x-100 沁泡1小时，37度摇荡。然后在缓冲液中泡1小时，37度摇荡，再上样前不能加热。不过，只有很少一些蛋白可以复兴，最好的办法环视