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- 文献和实验
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4-(3-iodopyrazol-1-yl)-2-methoxypyridine
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文献和实验、低温、时间长、盐浓度高;若用于突变检测,则杂交条件相反。芯片分子杂交的特点是探针固化,样品荧光标记,一次可以对大量生物样品进行检测分析,杂交过程只要30min。美国Nangon公司采用控制电场的方式,使分子杂交速度缩到1min,甚至几秒钟(6)。德国癌症研究院的Jorg Hoheisel等认为以肽核酸(PNA)为探针效果更好。 4 杂交图谱的检测和分析 用激光激发芯片上的样品发射荧光,严格配对的杂交分子,其热力学稳定性较高,荧光强;不完全杂交的双键分子热力学稳定性低,荧
板孔中,每孔40μl,再加20μlUV照射的石蜡覆盖,按下述温度在PCR仪上进行PCR周期:起始变性94℃5min;30个周期:变性94℃5min,退火58℃1min,延伸72℃1min,最后延伸72℃ 5min,得到的PCR产物为特定的261bp的片段。 参考流程 1. 用0.85% NaCl将细菌溶液稀释至一定浓度; 2. 加50μl于微孔板内,4℃过夜。同时设阴性对照(加50μl 0.85% NaCl于另一孔内); 3. 用400μl的0.05% 温20pBS(以下简称TPBS
-40。当用纯化的蛋白时,250-300ng足以形成凝胶迁移复合物,而需用10μg的HeLa细胞核抽提物。凝胶迁移复合物在室温中保温30分钟,在50mM Tris(pH8.3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离凝胶迁移复合物。含考马斯兰和二甲苯蓝色素的加样溶液只能加入到阴性对照反应中,因这两种色素会加剧NF-kB复合物的解离。当用HeLa细胞核抽提物作为结合蛋白来源时,可形成两种序列特异的凝胶迁移复合物,即p50/p50同源双聚体和p50/p65异源双聚体。在表达p49,p50,p65
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