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【资源】蛋白纯化经验指南（）

时你们一般用多少柱床体积？10X够了吗？ 一般也就3-5个床体积吧，离子交换需要平衡体积大点也，10X足够了 101) 有个关于胰岛素精纯化的问题想向你请教，我已取得95%纯度样品。但杂质大于1%，进一步纯化，用什么柱子，具体操作又怎样做呢，谢谢赐教。 我知道，我好象回复过，你用反相硅胶10um的柱子1.0X25cm或者2.2X25cm的柱子做制备，这样可以达到99%以上的纯度，别的方法很难做到你需要的纯度，此外胰岛素也可以用等电点沉淀的办法去掉一些杂质。 HPLC制备你可以参考

蛋白纯化经验指南

沉淀，我用0.5%CHAPS助溶可勉强溶解部分，目的蛋白疏水性比较强。既然是疏水性很强你可以加点甘油或者乙二醇降低极性，这样溶解就会好得多，此外你也直接加2%的PEG这样也降低极性，同时保护你的蛋白，你再做纯化就可以了，我以前遇到这样的蛋白是用10%的乙醇加3-5%的PEG5000，这样的情况下蛋白还是活性回收率很高，我觉得那些表面活性剂能不用还是不用的好，你失去活性你可以监测一下提取，纯化，酶切到底哪里失去了活性，这样更容易解决你的问题。还有注意缓冲液PH值，看看改变它对溶解度有没有影响。蛋白

原创:下游纯化简易讲义

的HPLC分析，以及多肽的精细制备分离，分辨率极高，可以分离两种仅相差一个氨基酸的多肽。如血管紧张素（angiotensin）的几个亚型通过反相色谱可以很好地分离。 同一个样品在同一Source 30 RPC柱上进行分离，由于色谱条件进行了改变，色谱图截然不同，说明反相色谱具有高度的选择性。 四、应用举例 例一、一种抗HIV gp120单克隆抗体的Fab片断（E.coli中表达） 分子量：50 kD 等电点：11 表达定位：周质（periplasmic） 纯化策略：渗透压休克提取周质