1-氟吡啶三氟甲磺酸盐 1-Fluoropyridiniu

【资源】蛋白纯化经验指南（）

。我的蛋白是2KD，在做非还原电泳时，发现除了目的蛋白外，有二聚体和多聚体存在。目的蛋白占44%，余下大部分为二聚体和多聚体。但在做反相HPLC时，只出现两个峰，第一主峰占90%（目的蛋白的位置），出峰时间为13分钟，第二主峰占10%，出峰时间为3分钟。请问在做HPLC时，二聚体和多聚体是否发生改变？用此方法测定含有二聚体和多聚体存在的目的蛋白纯度，是否不妥？我用柱子是C4柱，5υm,300埃。流动相B用0.05%三氟乙酸的乙腈，流动相A用0.05%三氟乙酸的纯水。 我觉得蛋白的聚合应该和存在

蛋白纯化经验指南

，其实你要是条件好的话，仅一步就可以纯化到95%，我可以把我们的方法告诉你，你pM你的邮件给我就好了。 72）1。我的蛋白bind在C4 column 上了，100%的ACN都没办法洗下来，异丙醇也试过了，还有什么好方法？ 2。在跑RP-HPLC的时候，如果样品的盐浓度太高了，有影响么？ 那实在不型可以考虑极性更低的乙酸乙酯等物质。此外洗不下来有没有可能变性沉淀在柱子上下不来，你的100%的ACN里面有三氟乙酸吗，我觉得出不来的原因有不少，不一定仅是洗脱的问题，所以用反相分离蛋白还是得很小

原创:下游纯化简易讲义

（注射用降纤酶） 分子量：38 kD；等电点：~5.4 原工艺：阴离子交换，凝胶过滤，第二次阴离子交换，凝胶过滤 达到95%以上纯度，产量6000-10000单位/克蛇毒。(两周) 新工艺：亲和色谱，阴离子交换，凝胶过滤，亲和色谱（一周） 纯度达到98.5%以上，产量达20000-25000单位/克蛇毒。 尖吻蝮蛇毒经过五个步骤的分离纯化后，获得了单成分降纤酶组分，电泳为一条带，HPLC为单峰。 如上图所示，由于每一个步骤均会带来一定的损失，故在可能的情况下应尽量减少下游纯化的步骤