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广州市左克生物
产品简介:
品牌:MeisenCTCC/浙江美森
货号:CTCC-001-0837-CM
产品名称:逆转录病毒包被的TK-NIH3T3细胞完培PG13-CM
培养体系: DMEM + 10% FBS
品牌介绍:
MeisenCTCC致力于成为国内领先的细胞制品研发与服务公司,始终围绕解决我国生命科学和生物制药长期缺乏标准品资源库的“痛点”,以卓越的品质、高效的服务构建以MeisenCTCC(Meisen Chinese Tissue Culture Collections)为代表的细胞资源平台,为大学院校、科研机构及生物医药研发企业提供高质量、可回溯、品控可靠的生物制品。 除此以外,MeisenCTCC细胞库还积极通过自身研发、学术共享等方式提供多种干细胞类细胞产品,包括iPSC、胚胎干细胞、间充质干细胞等。 MeisenCTCC资源库致力于为科研工作者提供即时、高质量的通用细胞产品,以解决国内细胞生物学研究长期以来面临的细胞进口时间长、运输过程风险大、无售后技术服务的“卡脖子”问题。 目前,MeisenCTCC资源库中已经涵盖高引用的通用细胞系,并不断拓展,力争短期内实现主要细胞产品全覆盖。为保证品质,所有通用细胞产品,皆与溯源库保持一致的质量监控流程与标准,并提供完善的售后技术服务,让所有国内细胞工作者不再为基础培养技术问题所困扰。
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文献和实验、PG13、DA、CFA(第三代包装细胞),包装细胞可提供逆转录病毒gag、pol和env蛋白才能使带有包装信号及目的基因的病毒载体RNA进行包装,包装细胞只提供gag、pol和env蛋白而不产生具有复制能力的野生型病毒(RCR),而第一代包装细胞可产生 RCR,安全性较差;第二代包装细胞,临床上已广泛应用,也未发现产生RCR,安全性好;第三代包装细胞更加安全,第三代包装细胞中主要区别是病毒结构基因中env不同。 反转录病毒作为基因转移的载体有如下特点:①反转录病毒感染细胞的效率高,基因
培养基:用含10%胎牛血清的DMEM培养液配制G418,G418浓度为200~800mg/L注意:对受体细胞先做预试验,选用浓度为在10~14天内能杀死细胞50%以上的最低浓度。2、操作步骤:(1)供体DNA制备:方法按前介绍的DNA提取法提取,溶于TE中,40mg/L。(2)受体细胞的培养:研究癌基因转移应选择不含人类Alu序列的动物细胞系作为受体细胞。如小鼠NIH3T3胚成纤维细胞系等,该细胞有一定自发转化倾向,一般在转染前一天接种细胞,接种密度为2×104/cm2,用含10%胎牛血清的DMEM液
启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成,能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。此外, 载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制, 而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。 用途: 该表达载体EGFP上游有Nde1、Eco47111和Age1克隆位点,将外源基因扦入这些位点,将合成外源基因和EGFP的融合基因。 借此可确定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位
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