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文献和实验第一代抗体—— 血清多克隆抗体(PcAb) 20世纪初期发现血清抗体和细菌毒素的作用,可用于多种疾病的治疗。多克隆抗体生产过程遇到免疫动物制备的血清抗体具有免疫原性和非均质性的特点,给抗体的研究和应用造成困难,但是由于血清多克隆抗体识别抗原的广谱性,以及识别不同表位的各种抗体或识别同种抗原表位的不同克隆的抗体可协同作用,因而能高效地识别抗原和阻断抗原对机体的危害,所以血清抗体至今仍为诊治疾病和生命科学研究重要制剂。 第二代抗体——单克隆抗体(McAb) 将经绵阳红细胞免疫后的小鼠
【实验 目的 】 ⒈ 加深对抗体基本知识的了解。 ⒉ 了解多克隆抗体的制备及纯化的基本方法。 ⒊ 了解免疫电泳的基本过程和实验依据。 一、多克隆抗体的制备 【实验 原理 】 当将抗原注射入实验动物体内时,一系列抗体生成细胞会不同程度的与抗原结合,受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体,这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。多克隆抗体
; 2、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议用单克隆抗体看看; 3、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色; 4、非特异性组分与抗体结合,这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果; 5、缩短 DAB 孵育时间或降低 DAB 浓度/过氧化氢浓度等; 6、适当增加 PBS 冲洗次数和浸洗时间,在一抗、二抗或 SP 孵育之后的浸洗尤为重要; 7、防止标本染色过程中
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