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文献和实验huaxiflame05 各位，我的实验最近遇到了问题，检测一个趋化因子，Western 重复性很差，只有蛋白上样量接近200ug的时候才能勉勉强强看到很弱的条带，并且杂带很多。师兄建议让公司合成纯化蛋白。但问题是原核表达的蛋白分子量35kDa，在真核系统里，这个蛋白质高度糖基化，分子量可达到60kD。在这种情况下，如何构建阳性对照呢？ ***解答 magichunter 换成单克隆抗体应该特异性更好
抗大鼠波形蛋白单克隆抗体，l：200稀释度)，4℃过夜或37℃孵育30分钟，BS漂洗3次，每次5分钟； (7)滴加与第一抗体种属匹配的荧光素标记二抗(如羊抗小鼠FITC-IgG。1：100)，37℃避光孵育30分钟，PBS漂洗3次，每次5分钟； (8)Hoechst 333442复染细胞核15～20分钟(不是必需步骤)； (9)甘油磷酸缓冲液封片，荧光显微镜下镜观察； (10)结果分析：波形蛋白免疫反应阳性细胞胞质呈现绿色荧光，如细胞核复染后可呈现亮蓝色荧光。阴性细胞仅见细胞
聚苯乙烯表面可以用作亲和性试剂的不溶性基质，以分离淋巴细胞亚群。聚苯乙烯培养皿首先用纯化的羊抗鼠IgG抗体包被，然后将鼠抗人(如抗CD4或抗CD8单抗)与T细胞反应的细胞悬液加入培养皿中，孵育一段时间后，对CD4或CD8抗原特异的T细胞即结合到平皿表面，而CD8+或CD4+细胞不结合，轻吸出未贴壁的细胞悬液，洗下粘附细胞。 [试剂及配制] (1)聚蔗糖-泛影葡胺分层液(D=1.077±0.001) (2)抗CD4和抗CD8单克隆抗体
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