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文献和实验Polymer二抗进行了反应的放大,该方法敏感性较高,可缩短抗体孵育时间或降低抗体浓度。 (2)内源性过氧化物酶残余:适度延长内源性过氧化物酶阻断剂阻断时间。 (3)一抗导致的非特异性染色:多克隆抗体易于产生非特异性染色,结合抗体官网信息合理选择多克隆抗体或单克隆抗体。 (4)一抗种属来源与组织样本来源相同:如使用鼠源一抗检测小鼠组织,尽量选择种属来源与样本种属不同的一抗。 (5)切片或细胞过于干燥:实验过程中,需保持样本的湿润。 Q5:阳性染色细胞定位不正确,如何修正? (1)抗原修复条件不合理:尝试改变
稀释标本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加热血清使C1q灭活。(3)嗜异性抗体 人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig (s) 结合的天然嗜异性抗体,可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来,也能造成假阳性。解决的办法是:可在标本稀释液中加入过量的动物Ig (s) ,但加入量不足或亚类不同时无效。(4)嗜靶抗原的自身抗体 抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体,有时能与靶抗原结合形成复合物,在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定结果。为避免以上情况出现,解决的办法是:测定前
结合位点被暴露出来,使 C1q 可以将二者连接起来,从而造成假阳性。解决的办法是:①用 EDTA 稀释标本;②用 53℃,10 min 或 56℃,30 min 加热血清使 C1q 灭活。(3)嗜异性抗体 人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig (s) 结合的天然嗜异性抗体,可将 ELISA 系统中一抗和二抗连接起来,也能造成假阳性。解决的办法是:可在标本稀释液中加入过量的动物 Ig (s) ,但加入量不足或亚类不同时无效。(4)嗜靶抗原的自身抗体 抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体
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