非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测试剂盒(含外源内参+内源内参)

相对定量，你的内参选对了吗？

荧光定量 PCR 的主要用途之一是相对定量，而提到相对定量，必然离不开内参，那什么是内参基因？为什么相对定量必须使用内参？如何选择正确的内参基因？今天，我们就来聊聊关于内参的那些事。 什么是内参？ 内参基因，也称为管家基因，其编码蛋白是维持细胞基本生命活动所必须的蛋白质。它的表达水平不受任何内源性与外源性因素的影响。管家基因高度保守且在大多数情况下持续表达，稳定表达于不同类型的细胞和组织中。 为什么相对定量必须使用内参？ 那内参基因与相对定量又有什么样的关系呢？我们通过以下实验案例一起

如何做好 WB 方案设计？你需要了解这些信息

，首先使用 Invent 柱式法胞质胞核分离试剂盒将样品分为胞浆蛋白和胞核蛋白，每组按照胞浆组分，胞核组分顺序分别上样，使用 GAPDH 作为胞浆内参，LaminA/C 作为胞核内参，验证胞质胞核分离成功无交叉污染。 检测目标蛋白 NF-ĸB p65，验证了过表达 circ-Sirt1 的血管平滑肌细胞（VSMCs）中，TNF-ɑ 诱导的 NF-ĸB p65 的核易位被显著抑制，并伴有促炎细胞因子和黏附分子表达减少（图 E）。相反，敲低内源性 circ-Sirt1 增强了 TNF-ɑ 诱导的 NF-ĸB

荧光定量 PCR——想要实验结果可靠，各种对照不可少

基因亦可用于对取样量进行均一化。 如果进行的是单管多重实验，还需考虑内参基因的表达量。当内参基因表达量远高于目的基因时，内参基因将优势扩增，体系中的原料消耗速度过快，造成目的基因扩增效率降低。此时可以选择引物浓度降低的 TaqMan 试剂盒（Primer-Limited）对内参基因进行测定。 表 2：常用人类内参基因试剂盒（cDNA） 如何避免污染发生？出现污染怎么办？ 样本间的交叉污染 为了避免样本之间的交叉污染，规范化的取样和样本保存非常重要。不同样本移液时谨记更换枪头，并尽量使用带