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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
9999
- 供应商:
普康智合(成都)生物制品有限公司
- 规格:
48T/袋/盒(含阴阳性对照)/96T/袋/盒(含阴阳性对照)
| 规格: | 48T/袋/盒(含阴阳性对照) | 产品价格: | ¥480.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T/袋/盒(含阴阳性对照) | 产品价格: | ¥920.0 |
产品描述:本试剂盒利用猪德尔塔冠状病毒 (PDCoV) 特异性引物及探针,搭配荧光PCR技术用于临床病原学体外扩增检测诊断。
建议采集部位:肛门拭子、小肠、肠液、粪便
病原:+ssRNA
一、简介
本试剂盒利用猪德尔塔冠状病毒 (PDCoV) 特异性引物及探针,搭配荧光 PCR 技术用于临床病原学体外扩增检测诊断。
二、用途
适用于检测样本中猪德尔塔冠状病毒 (PDCoV) 病原核酸。
三、试剂盒组成(48 反应/盒)
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名称 |
数量 |
成分 |
|
PDCoV real time PCR 冻干包 |
6 个独立密封铝箔包装, 每包含 1 管冻干管 (标记:PDCo); 8 反应数/管 |
包含特异引物,探针, 酶以及 dNTPs |
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冻干回溶液 |
450ul /管,3 管 |
为回溶 PDCoV real time PCR 冻干包缓冲液 |
|
PDCoV 阳性对照品 |
1 管 |
含有特异序列的人造质体 ,作为阳性对照 |
|
阳性回溶液 |
110ul /管, 1 管 |
回溶阳性对照的缓冲液 |
|
使用说明书 |
一份 |
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四、储存条件
试剂需保存于 4°C 以下。本产品于-20°C 条件下可稳定保存至标签上有效期。干粉包内的冷冻干燥管,应保存在妥善密封的铝质包装袋中,避免发生潮解现象。干粉包在使用前,应回复至室温状态,一旦开封 qPCR 冻干粉后需保存于-20°C。回溶后未使用完的干粉,请盖好管盖后保存于-20°C,一个月内使用完
试剂需保存于 4°C 以下 。本产品于-20°C 条件下可稳定保存至 标签上有效期 。干粉包内的冷冻干燥管,应保存在妥善密封的 铝质包装袋中,避免发生潮解现象 。干粉包在使用前,应回复 至室温状态,一旦开封 qPCR 冻干粉后需保存于-20℃ 。回溶后 未使用完的干粉,请盖好管盖后保存于-20℃ , 一个月内使用完。
五 、荧光 PCR 适用范围
各厂家荧光 PCR 仪器皆适用 。部分仪器请依照 real time PCR 设备建议添补适量参比染料。
六 、 样本采集
前处理及核酸提取: 请依照病原学指示采取相关病灶处进行前 处理及核酸提取
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勾选 |
样本类型 |
处理方式 |
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组织样本 |
取绿豆大小组织;放入装有 500ul 样本保存液 1.5ml 离心管中; 以一次性研磨棒进行研磨;离心 1 分钟;取上清液备用 |
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全血样本 |
使用 EDTA 抗凝管全血样本备用 |
|
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血清样本 |
抽取血液样本后等待血液凝固 (或以低速离心);取 上清液备用 |
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拭子样本 |
以细棉签反复涂抹采样部位或环境区域;将棉头部 分放入装有 500ul 样本保存液 1.5ml 离心管中并 碾磨数秒; 离心 1 分钟;取上清液备用 |
*上述样本建议搭配厦门普康同创生物科技有限公司磁珠法及管柱法核酸 抽提试剂盒进行核酸抽提
七 、 检测步骤
(1) 取出冻干包与冻干回溶液;每管冻干试剂以 180ul 冻干回 溶液进行回溶。
(2) 反应体系按下表配制。
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反应成分 |
体积/反应 |
|
步骤 (1) 回溶完成试剂溶液 |
20μl |
|
核酸样本 |
5μl |
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总体积 |
25μl |
(3) 阳性对照使用前按下表配制;使用前请充分震荡均匀
5 分钟再取用 。(于特殊情况下如果阳性对照品已是水剂 状态,可直接使用)
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反应成分 |
体积/反应 |
|
阳性对照品 (红头管) |
1 管 |
|
阳性回溶液 (黄头管) |
100μl |
|
总体积 |
100μl |
(4)阴性对照使用纯净水作为检测反应阴性对照样本。
(5) 反应条件
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循环次数 |
温度 |
时间 |
|
1 |
50℃ |
10 分钟 |
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1 |
95℃ |
3 分钟 |
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45 |
95℃ |
15 秒 |
|
60℃ (收集荧光 FAM) |
30 秒 |
八 、结果分析
(1) 结果分析条件设定上反应时应同时搭配阴阳性对照进行检 测分析;依设备自动分析直接读取结果(若有需要手动 调整结果分析,请与业务技术人员联系)。
(2) 实验结果成立条件 (以下条件均须满足,无法满足则代表 实验失败)
a. 阴性对照: 无任何扩增反应及信号。
b. 阳性对照: 出现典型扩增反应及信号
(3) 结果判定
a. 实验条件成立下,Ct≦37 样本判定为阳性。
b. 实验条件成立下,无 Ct 样本判定为阴性。
c. 实验条件成立下, 37
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阳性对照 |
NTC |
样本 |
结果 |
|
阳性 |
阴性 |
阳性 |
样本为阳性 |
|
阳性 |
阴性 |
阴性 |
样本为阴性 |
|
阳性 |
阳性 |
阳性 |
实验污染,建议重做检测 |
|
阴性 |
阴性 |
阳性/阴性 |
实验失败,建议重做检测 |
※ 使用 ABI qPCR 检测系统分析数据时, 应将分析阈值设置为 默认 0.2 , 如设置上有任何疑问请联系厂家技术人员咨询 。
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文献和实验,其中规定了确诊病例的诊断方法:具有急性发烧呼吸道疾病的临床症状并且经实时荧光定量PCR (real-time RT-PCR)或病毒分离培养 (viral culture)实验室检测方法检验证实感染A(H1N1)型猪流感病毒。卫生部办公厅于4月30日印发了《人感染猪流感预防控制技术指南(试行)》的通知》[7],其中在实验室检测和病例诊断报告章节,内容如下:检测程序呼吸道标本应首先应用real time RT-PCR方法检测A型流感病毒的M基因、Swine( H1N1)的HA基因和NP基因,以及质控对照
。因此,以PCR技术为代表的核酸诊断技术在临床诊断中得到日益广泛的应用。传统的PCR检测模式 传统的PCR检测模式一般需要三个步骤:1.首先需要对待测标本进行处理:通过裂解、纯化,提取标本中的病原体核酸(DNA或RNA)作为PCR扩增的模板;2. 采用PCR或RT-PCR技术对提取到的病原体核酸进行扩增;3.检测PCR扩增产物,检测方法包括凝胶电泳和类似于酶免反应的PCR-ELISA等。实时荧光PCR检测技术 近年来,PCR技术有了重大改进。将传统PCR检测模式中的PCR扩增和检测相结合(即在同一个密闭
s18s定还是用SB GAPDH或者β-actin都是,但是Northern得出的是绝对组织丰度,而实时荧光定量RT-PCR虽然准确(定量)但是得出的是相对表达丰度,不管使用β-actin还是用18srRNA.至于常规的通过跑电泳的所谓”定量”RT-PCR那就远了去了。 另外,似乎有人认为要做的好,就要把条件摸得哈好的,一旦很好,就不更改,PCR条件,徨论Taq酶,窃以为实不足取,为何?我说的“摸”是指循环数和模板,如果连taq也要固定下来,其不是别人重复不了了(了用的太多了)?因为检测的是相对量
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