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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
现货
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件:
4℃
- 规格:
100ml
产品简介:
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞、组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解后的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA裂解液有很多配方,按效果来分主要分为强,中,弱三种。本裂解液为RIPA强裂解液,其主要成分为50mM Tris-Hcl,150mM NaCl,1 mM EDTA-Na2, 1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS。
包装内容:
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 | 储存条件 |
| JK-223 | RIPA裂解液(强) | 100ml | 4℃避光 |
保存条件:
4℃避光保存,有效期12个月。
使用方法:
对于组织样品:
1.组织块用冷PBS洗涤,去除血污。剪成小块置于匀浆器中。
2.加入10倍组织体积本试剂(使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂)冰上彻底匀浆。
3.将匀浆液转移至1.5ml离心管中,振荡。冰浴30min,期间用移液器反复吹打,确保细胞完全裂解。
4.12000g离心5min,收集上清,即为总蛋白溶液。
对于培养细胞样品:
1.对于贴壁细胞:
(1)用PBS冲洗细胞2-3次。最后一次彻底吸干残留液。
(2)加入适当体积的细胞总蛋白提取试剂(使用前数分内加入蛋白酶抑制剂)于培养板、瓶内3-5分钟。期间反复晃动培养板、瓶,使试剂与细胞充分接触。
(3)用细胞刮刀将细胞及试剂刮下,收集到1.5ml离心管中。
2.对于悬浮细胞:离心收集细胞,每6孔板细胞加约250 μl细胞总蛋白提取试剂(在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂),振荡。
3.冰浴30min,期间每10分钟用200 μl移液器反复吹打数次,确保细胞完全裂解。
4.12000g离心5min,收集上清,即为总蛋白。
注意事项:
对于组织样品:每50mg组织约加入1ml的本试剂裂解。对于软骨、皮肤等组织,可适当减少试剂用量,以提高蛋白浓度。
对于培养细胞样品:
1.正常细胞密度下,每个6孔板细胞加入250 μl左右裂解液。其它类推。
2.裂解时可能会出现较粘稠状。可用移液器反复吹打,直至呈液状为止。如果一直较稠,可再加入适量裂解液。
3.此试剂对人体有害,请适当防护。
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文献和实验棕色小玻璃瓶,标准包装10mg,20mg,50mg,100mg,或根据客户要求提供相应包装
细胞凋亡是一种在基因控制下的细胞主动死亡过程,通常表现为核浓缩,起皱,膜发泡以及 DNA 片段化。WB 是研究细胞凋亡机理的基本方法之一,但是 WB 也不是谁都能做成功的,因为有可能你的第一步就做错了!用 WB 做细胞凋亡研究样品制备是第一步,样品制备方法至关重要否则会得到错误的结果和结论。样品制备,看你是不是这样做的:自配裂解液或者购买 RIPA,加上样品研磨啊研磨,孵育啊孵育,然后离心扔掉沉淀(RIPA 不可溶组分),取上清(RIPA 可溶组分)进行下游实验。对对对!都是这么做啊,扔
2,左条带为使用普通强裂解液提取的蛋白样品,右条带为柱式法提取的蛋白样品,可见使用柱式法法提取的样品胶孔中可明显改善样品滞留、拖带的情况发生。 图 2:同种样品分别使用裂解液法和柱式法进行 WB 样品制备,SDS-PAGE 电泳后考染图 图片来源:英文特 WB 蛋白样品制备过程中出现样品粘稠的情况并不代表样品提取失败,而是样品裂解较为充分的表现,但是如果放任不管则会引发一系列连锁效应,最终导致 WB 实验失败。选择合适的方法进行处理。成功获得高质量的蛋白样品,是 WB 实验成功必不可少
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