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- dojindo
- C557-20ul
- 2026年06月24日
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50
- 供应商：
广州市左克生物
- 规格：
20ul
产品简介:
品牌：DOJINDO/东仁
货号：C557-20ul
产品名称：铜死亡-细胞内一价铜离子探针
铜离子的作用
尽管铜在生物体内仅以微量存在，但作为一种过渡金属，它在调控呼吸和代谢等生命现象的酶的活性中心中起到了重要作用。具体来说，铜通过帮助运输铁来促进血红蛋白的合成，从而活跃铁代谢；同时，它与superoxide dismutase1 (SOD1)结合，以清除活性氧。这表明铜在维持我们的生命活动中具有重要作用。
此外，在关于细胞死亡的研究中，近年来铜也引起了关注。作为一种相对较新的细胞死亡途径，以铁(II)离子为起点的Ferroptosis研究非常活跃。而与Ferroptosis不同的是，以铜(I)离子为起点的新型细胞死亡途径（Cuproptosis）也被发现了。CuprosGreen是一种能选择性地与细胞内的铜(I)离子反应并发出荧光的荧光探针。由于它具有细胞膜透过性，因此能够进行铜(I)离子的活细胞成像。
1) Tsvetkov et al., Science, 2022, 375, 1254–1261
可用于荧光显微镜成像和酶标仪定量检测
在HeLa细胞中，评估了添加CuCl₂（在细胞内被还原为一价铜离子）后细胞内一价铜离子含量的变化。通过CuCl₂的添加，与对照组相比，细胞内的一价铜离子显著增加，这一结果通过共聚焦显微镜和微孔板读数检测法均得到了验证。
荧光特性
实验例：检测CuCl₂浓度依赖性细胞内一价铜离子的变化
在HeLa细胞中，评估了CuCl₂处理引起的浓度依赖性细胞内一价铜离子的变化。通过共聚焦显微镜观察到，与对照组相比，添加CuCl₂后细胞内的一价铜离子量呈浓度依赖性增加。
实验例：使用新型铜离子载体Elesclomol诱导的铜死亡（Cuproptosis）现象
Elesclomol是一种新型的铜离子载体，能够促进二价铜离子（Cu²⁺）进入细胞内，从而诱导铜依赖性的细胞死亡（Cuproptosis）。
对A549细胞进行CuCl₂和Elesclomol处理以诱导铜死亡，并测量了细胞内一价铜（细胞内铜检测荧光探针）、线粒体膜电位（JC-1 MitoMP Detection Kit）、细胞内活性氧（ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-）以及作为死细胞指标LDH（Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST）。结果表明，与单独使用CuCl₂处理相比，Elesclomol的联合使用显著增加了细胞内一价铜，并且观察到了线粒体膜电位的降低。此外，细胞内ROS和细胞外LDH两个指标在CuCl₂和Elesclomol联合处理组中显著增加，从而确认了铜死亡的诱导。
常见问题Q&A
| Q1：说明书中写明需要在无血清培养基中制备CuprosGreen工作液，为什么需要使用无血清培养基？ |
| A1：如果在含血清的培养基中制备CuprosGreen工作液，与在无血清培养基中制备相比，荧光强度会降低。为了优化CuprosGreen的性能，建议使用无血清培养基进行制备。 |
| Q2：CuprosGreen工作液可以用PBS或HBSS制备吗？ |
| A2：由于CuprosGreen的孵育时间为3小时，为了减少长时间孵育可能带来的细胞毒性，建议使用无血清培养基进行制备。 |
| Q3：说明书中写明染色后不进行洗涤操作就直接观察细胞，为什么这样做？ |
| A3：由于CuprosGreen的结构特性，洗涤操作会导致部分染料脱落。为了优化CuprosGreen的性能，建议不进行洗涤操作，直接观察。 |
| Q4：工作液的制备方法是先用DMSO稀释CuprosGreen，再添加无血清培养基。这与直接将CuprosGreen添加到无血清培养基中有什么区别？ |
| A4：采用上述步骤是为了确保CuprosGreen在无血清培养基中均匀分散。如果直接将CuprosGreen添加到无血清培养基中，可能会导致CuprosGreen在培养基中析出。因此，请按照上述步骤制备工作液。 |
| Q5：铜离子检测的阳性对照组应该如何设置？ |
|
A5：我们提供以下两种阳性对照组可供选择： 方案1：100 μM CuCl₂ / MEM（含血清），19小时培养
方案2：10 μM Es，100 μM CuCl₂ / MEM（不含血清），2小时培养
注意事项： ·方案1：当使用100 μM CuCl₂，并在19小时内培养时，培养基务必含有血清。此条件下，Cu²⁺会部分被血清中的GSH还原为Cu⁺，并通过SLC31A1进入细胞。 ·方案2：当使用10 μM Es和100 μM CuCl₂，并在2小时内培养时，培养基不可含血清。此时，Cu²⁺将与Es结合形成Cu²⁺-Elesclomol复合物，直接进入细胞。如果培养基中含有血清，Cu²⁺将被还原为Cu⁺，而Cu⁺无法与Es形成复合物，无法进入细胞内。 详见下图
补充信息：关于铜死亡（Cuproptosis），在《Science》上最早发现铜死亡的论文《Copper induces cell death by targeting lipoylated TCA cycle proteins》中，采用了方法2（10 μM Es，100 μM CuCl₂ / MEM，不含血清，2小时培养）来诱导Cuproptosis。通过该方法，Cu²⁺与Es结合形成Cu²⁺-Elesclomol复合物，直接进入细胞，进而诱导细胞死亡。 |
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文献和实验5个核心要点读懂“铜介导的细胞命运密码” 2022年被正式命名的铜死亡(Cuproptosis) 作为新型调控性细胞死亡方式 已成为生命科学领域的研究热点 SOLARBIO 铜死亡的基本概念与核心机制 促进铜诱导细胞死亡的机制示意图[1] 铜死亡是铜依赖性的程序性细胞死亡形式，区别于凋亡、铁死亡等传统方式，其核心机制围绕线粒体代谢紊乱展开： 关键启动事件 细胞内铜离子（尤其是毒性更强的Cu⁺）异常蓄积，打破铜稳态平衡。这一过程依赖上游调控因子FDX1（铁氧还蛋白
，Bradford，双缩脲法（Biuret 法），Folin 法（Lowry 法）和紫外分光光度计法。BCA 法的原理是在碱性条件下，氨基酸将二价铜还原为一价铜与 BCA 形成紫颜色的络合物，测定 562 nm 的 OD 值，所以如果样本里有还原剂（比如 DTT）的话就会对 BCA 的结果产生干扰。Bradford 法（考马斯亮蓝法）是在酸性条件下，加入考马斯亮蓝 G250 与蛋白质（主要是碱性或芳香族氨基酸）结合为蓝色化合物，吸光度值从 465nm 变成 595 nm，最后测定 595 nm 的 OD 值
硅片、或者铜网上，之后采用乙醇或丙酮进行脱水，干燥之后进行导电镀膜处理。 观察样品断面或内部结构：样品按照通常程序进行固定，脱水，然后包埋在树脂中。用超薄切片机切为500nm到1000nm的的薄片，之后固定在晶片上。 中科院纳米离子探针实验室所分析样品需要已经完成分析区域的定位，如没有位置分析将不予以考虑上机分析。如需二次电子图像或背散射图像，可联系扫描电镜实验室(负责人闫欣 TEL： 82998591, 82998592)。
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