非特异结合性封闭液

WB实战指南（四）之 难点：抗体孵育

抗体孵育——WB真正的难点：抗体的使用是一种艺术，一种抗体一个脾气。对WB结果有决定性影响的因素是抗体的效价和如果正确使用手中的抗体。无论你如何提高自己的转膜技术，高效和低效之间往往只有数倍的差异，而抗体的效价可以差数千倍以上；同样，正确使用抗体可以保证抗体效价不被过分的拮抗，谋求特异性和非特异性背景之间差异的最大化。封闭最短可以缩减到5min：很多人把高背景或者黑板，认定为封闭不充分，其实这也是没有吃透WB（说实话，经常看到坛子上很多人这样给人答疑，非常的无语）；实际上封闭（极端

免疫组化常见十大问题与解析

不完全，若存在，需延长脱蜡时间或换用新的二甲苯。 （5）抗原修复不完全：对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合。 （6）细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应：可加入组织透化步骤，进行细胞膜或核膜的透化。 （7）试剂盒保存不当：请于 4℃ 进行保存，勿室温防止过长时间。 （8）封闭时间过长：若使用封闭液进行封闭，请排除封闭液对抗原抗体结合的影响。 Q2：免疫组化染色弱怎么办？ （1）抗体浓度过低，孵育时间过短：可提高抗体浓度，进行抗体4℃过夜孵育。 （2）组织

WB 实验，你都碰到过哪些奇葩的条带

相信很多人在做 Western blot 实验时，会遇到各式各样奇怪的现象，为了让大家少走弯路，下面就跟大家来分享一下实验过程中会出现哪些现象，是什么原因，如何来解决。以下列举的情况可都是我们的实验员在多次实验中所积累的真实经验，内容文字少，全是干货。1. 出现黑点或黑斑原因：试剂污染，抗体结合到封闭剂解决方法：使用新鲜配置的试剂；过滤封闭液；选用其他类型封闭液2. 条带中出现边缘规则的白圈原因：转膜时膜和胶中间有气泡，或抗体在膜上未均匀分散解决方法：制备转膜凝胶时用玻棒赶去气泡；使用摇床孵育