测氨基酸用什么柱子

高效液相色谱中氨基酸分析柱的选择与应用

 

在氨基酸分析领域，高效液相色谱（HPLC）是zuì为核心的技术手段之一，而色谱柱的选择直接决定了分离效果、灵敏度和分析效率。测氨基酸用什么柱子主要取决于目标氨基酸的理化性质、衍生化方法以及检测器的兼容性。反相色谱柱（如C18柱）是常规选择，尤其适用于衍生化后的疏水性氨基酸；而亲水相互作用色谱柱（HILIC）则更适合于极性氨基酸的直接分析，无需衍生步骤。离子交换色谱柱在传统氨基酸分析仪中仍占有一席之地，但其较长的分析时间和复杂的缓冲体系限制了其在高效分析中的应用。近年来，核壳型色谱柱因其高柱效和低背压特性，在快速氨基酸分析中展现出显著优势。

 

测氨基酸用什么柱子还需考虑固定相的粒径和孔径。亚2 μm粒径的色谱柱能够提供更高的理论塔板数，但系统耐压要求较高；3-5 μm粒径的色谱柱则更适合常规HPLC系统。对于复杂生物样品（如血浆或组织提取液），选择具有高载样量的宽孔径（300 Å以上）固定相可减少基质干扰。此外，色谱柱的化学修饰也至关重要——苯基柱对芳香族氨基酸的选择性更佳，而酰胺基修饰的HILIC柱能显著改善púānsuān和羟púānsuān的峰形。测氨基酸用什么柱子还需与检测方法匹配：若采用荧光检测，需避免固定相荧光背景干扰；质谱兼容性则要求固定相耐高温且不易发生离子抑制。

 

技术方法与操作要点

 

衍生化-反相色谱联用技术：邻苯二甲醛（OPA）或芴甲氧羰酰氯（FMOC）衍生后，C18柱可实现20种常见氨基酸的基线分离。梯度洗脱通常采用甲醇/水或yǐjīng/水体系，添加三fúyǐsuān（TFA）调节pH至2.5以下以抑制硅羟基效应。测氨基酸用什么柱子在此方案中需注意：普通C18柱对gǔānxiānàn和天冬酰胺分离度较差，而采用双齿配体修饰的C18柱（如AccQ-Tag专用柱）可解决这一问题。

 

直接HILIC分析：无需衍生的方案中，氨基柱或酰胺柱在yǐjīng-水（含5-10 mM甲酸铵）流动相下，能有效保留极性的酸性氨基酸（如天冬氨酸、gǔānsuān）。测氨基酸用什么柱子时需注意：HILIC柱的平衡时间较长（通常需10倍柱体积），且环境温湿度波动会显著影响保留时间重现性。

 

离子交换色谱的优化：钠型阳离子交换柱配合柠檬酸锂缓冲液梯度洗脱仍是氨基酸分析仪的经典配置，但分析时间常超过60分钟。新型磺酸基修饰的聚合物基质柱（如Hitachi #2622SC）可将时间缩短至30分钟，且耐碱性更强。

 

常见问题：

 

Q1. 在分析生理样品时，如何避免色谱柱因dànbáizhì残留导致的柱效下降？

A：建议在进样前采用10 kDa超滤膜去除大分子蛋白，或使用固相萃取（如Oasis HLB柱）预处理。对于已污染的色谱柱，可用0.1%磷酸-yǐjīng（50:50）反向冲洗再生。

 

Q2. 当同时分析游离氨基酸和小肽时，应如何选择色谱柱参数？

A：需采用300 Å孔径的宽孔C18柱，并优化梯度条件：初始高水相（≥95%）保留小肽，后期提升有机相比例洗脱疏水性氨基酸。建议使用低疏水性封端固定相（如ACE Excel C18-AR）以减少碱性氨基酸拖尾。