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- WS2120F
- 国内
- 2025年07月20日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Dehydroascorbic acid reductase (DHAR) Kit
- CAS号：
WS2120F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
脱氢抗坏血酸还原酶（dehydroascorbate reductase）试剂盒说明书
（货号：WS2120F 紫外法 48 样）
一、产品简介：
脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR，EC 1.8.5.1）又名谷胱甘肽脱氢酶（抗坏血酸）
（Glutathione Dehydrogenase (ascorbate)），存在于叶绿体、线粒体和细胞质中，是 AsA-GSH
循环中重要的酶，对维持细胞中抗坏血酸还原能力有重要作用。
DHAR 催化 GSH 还原 DHA 生成 AsA 和 GS SG，本试剂盒通过在 265nm 下检测 AsA
的生成速率来计算 DHAR 的酶活性大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
用前甩几下或 4℃离心使试剂落入
试管底部，再加 4.4mL 蒸馏水溶
解。
试剂三
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
用前甩几下或 4℃离心使试剂落入
试管底部，再加 4.2mL 蒸馏水溶
解。
三、所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、低温离心机、可调式移液器、研钵
四、脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样
本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，取
上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 液体样本：直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 紫外分光光度计预热 30 min，调节波长到 265nm，蒸馏水调零。
② 试剂一在 25℃水浴锅中预热 30 min。
③ 在 1mL 石英比色皿中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
40
试剂一
600
试剂二
80
试剂三
80
轻轻混匀，在 265nm 处，10S 和 3min10S 分
别读值，相应记为 A1 和 A2，△A=A2-A1。
【注】1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 10min10s 读取 A2，改变后的反应时间需代
入计算公式重新计算。或适当加大样本量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用
2
2. 若起始值 A 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会偏高），
可以适当减少样本加样量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
3. 若上升趋势不稳定，可以每隔 10S 读取一次吸光值，选取一段线性上升的时间段来参与计
算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、 按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
DHAR(nmol/min/mg prot) =（△A÷ε÷d×V2×109)÷(Cpr×V1)÷T
= 123×△A ÷Cpr
2、按样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克样本每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
DHAR(nmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V2×109÷(W×V1÷V)÷T
= 123×△A ÷W
3、按液体体积计算
活性单位定义：25℃中每毫升样本每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
DHAR(nmol/min/mL) = △A÷ε÷d×V2×109÷V1÷T
= 123×△A
ε ---AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol /cm；
d ---96 孔板光径，1cm；
V ---提取液体积，1 mL；
V2 ---反应体系总体积，800μL=8×10-4 L；
V1 ---加入样本体积，40μL =0.04mL；
W---样品质量；
T ---反应时间，3min；
Cpr---上清液蛋白浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
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脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)试剂盒
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