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脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)试剂盒

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  • ￥690
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  • WS2120F
  • 国内
  • 2025年07月20日
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    • 英文名：

      Dehydroascorbic acid reductase (DHAR) Kit

    • CAS号：

      WS2120F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    脱氢抗坏血酸还原酶（dehydroascorbate reductase）试剂盒说明书
    （货号：WS2120F 紫外法 48 样）
    一、产品简介：
    脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR，EC 1.8.5.1）又名谷胱甘肽脱氢酶（抗坏血酸）
    （Glutathione Dehydrogenase (ascorbate)），存在于叶绿体、线粒体和细胞质中，是 AsA-GSH
    循环中重要的酶，对维持细胞中抗坏血酸还原能力有重要作用。
    DHAR 催化 GSH 还原 DHA 生成 AsA 和 GS SG，本试剂盒通过在 265nm 下检测 AsA
    的生成速率来计算 DHAR 的酶活性大小。
    二、试剂盒组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 30mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉剂 mg×1 瓶
    4℃保存
    用前甩几下或 4℃离心使试剂落入
    试管底部，再加 4.4mL 蒸馏水溶
    解。
    试剂三
    粉剂 mg×1 瓶
    4℃保存
    用前甩几下或 4℃离心使试剂落入
    试管底部，再加 4.2mL 蒸馏水溶
    解。
    三、所需的仪器和用品：
    紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、低温离心机、可调式移液器、研钵
    四、脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样
    本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，取
    上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
    ② 液体样本：直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。
    2、上机检测：
    ① 紫外分光光度计预热 30 min，调节波长到 265nm，蒸馏水调零。
    ② 试剂一在 25℃水浴锅中预热 30 min。
    ③ 在 1mL 石英比色皿中依次加入：
    试剂名称（μL）
    测定管
    样本
    40
    试剂一
    600
    试剂二
    80
    试剂三
    80
    轻轻混匀，在 265nm 处，10S 和 3min10S 分
    别读值，相应记为 A1 和 A2，△A=A2-A1。
    【注】1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 10min10s 读取 A2，改变后的反应时间需代
    入计算公式重新计算。或适当加大样本量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用
    2
    2. 若起始值 A 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会偏高），
    可以适当减少样本加样量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
    3. 若上升趋势不稳定，可以每隔 10S 读取一次吸光值，选取一段线性上升的时间段来参与计
    算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、 按蛋白浓度计算
    活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
    DHAR(nmol/min/mg prot) =（△A÷ε÷d×V2×109)÷(Cpr×V1)÷T
    = 123×△A ÷Cpr
    2、按样本质量计算
    活性单位定义：25℃中每克样本每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
    DHAR(nmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V2×109÷(W×V1÷V)÷T
    = 123×△A ÷W
    3、按液体体积计算
    活性单位定义：25℃中每毫升样本每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
    DHAR(nmol/min/mL) = △A÷ε÷d×V2×109÷V1÷T
    = 123×△A
    ε ---AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol /cm；
    d ---96 孔板光径，1cm；
    V ---提取液体积，1 mL；
    V2 ---反应体系总体积，800μL=8×10-4 L；
    V1 ---加入样本体积，40μL =0.04mL；
    W---样品质量；
    T ---反应时间，3min；
    Cpr---上清液蛋白浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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