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抗坏血酸氧化酶(AAO)试剂盒

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  • ￥590
  • wksubio
  • WS5020F
  • 国内
  • 2025年09月23日
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    • 英文名：

      Ascorbate Oxidase (AAO) Kit

    • CAS号：

      WS5020F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    抗坏血酸氧化酶（ascorbate oxidase，AAO）试剂盒说明书
    （货号：WS5020F 紫外法 48 样）
    一、产品简介：
    抗坏血酸氧化酶（AAO；EC 1.10.3.3）是一种含铜的酶，属“蓝铜氧化酶”家族。也是植物体内的末端
    氧化酶的一种。其有助于植物对外界环境条件的适应。抗坏血酸氧化酶（AAO）直接氧化 AsA，通过测定
    AsA 的氧化量，可计算该酶活力。
    二、试剂盒组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    使用前摇匀
    试剂一
    液体 45mL×1 瓶
    4℃保存
    使用前摇匀
    试剂二
    粉体×1 支
    4℃保存
    用前甩几下或 4℃离心使试剂
    落入试管底部，再加入 3mL 蒸
    馏水充分溶解，一周内使用完。
    三、所需的仪器和用品：
    紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、低温离心机、可调式移液器、研钵
    四、抗坏血酸氧化酶（AAO）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样
    本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。
    12000rpm，4℃离心 15min，取上清液置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
    2、上机检测：
    ① 分光光度计预热 30 min，调节波长到 265 nm，蒸馏水调零。
    ② 试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min。
    ③ 依次在 1 mL 石英比色皿中加入：
    试剂（μL）
    测定管
    样本
    100
    试剂一
    850
    试剂二
    50
    迅速混匀，30s 和 2min30s 时分别在 265nm 读值，
    分别记为 A1 和 A2，△A =A1-A2。
    【注】：1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 5min10s 读取 A2，改变后的反应时间
    需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量，则改变后的加样体积需代入计算公式
    重新计算。
    2. 若起始值 A 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会
    偏高），可以适当减少样本加样量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
    3. 若下降趋势不稳定，可以每隔 10S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参
    与计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按蛋白浓度计算
    酶活定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。本试剂盒仅供科研使用
    AAO(nmol/min /mg prot) = [△A÷(ε×d）×V2×109]÷(Cpr×V1)÷T= 92.25×△A÷Cpr
    2、按样本质量计算
    酶活定义：25℃中每克样本每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
    AAO(nmol/min/g 鲜重) = [△A÷(ε×d）×V2×109]÷(W×V1÷V)÷T= 92.25×△A÷W
    ε----AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol/cm；
    d----比色皿光径（cm），1 cm；
    1mol=1×109 nmol；
    Cpr----上清液蛋白质浓度（mg/mL），建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；
    W----样品质量；
    V----提取液体积，1 mL；
    V1----加入反应体系中上清液体积（mL），100μL=0.1 mL；
    V2---反应体系总体积（L），1000μL=1×10-3 L；
    T----催化反应时间（min），2min。若延长反应时间，则以具体时间代入公式重新计算。
    2

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