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- wksubio
- WS6510F
- 国内
- 2025年07月20日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Ornithine Dease (ODC) Activity Detection Kit
- CAS号：
WS6510F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
24T
本试剂盒仅供科研使用
乙二醛酶Ⅱ(glyoxalaseⅡ,GlyⅡ) 活性测定说明书
（货号：WS5410F 分光法 48 样）
一、产品简介：
乙二醛酶系统是甲基乙二醛（MG）的主要清除途径，乙二醛酶Ⅱ（GlyⅡ，EC 3.1.2.6）
是乙二醛酶系统中的一种酶。在哺乳动物，植物和细菌中普遍表达。
乙二醛酶Ⅱ催化 S-D-乳酰谷胱甘肽(S-D-lactoylglutathione, SLG)水解为还原型谷胱甘
肽（GSH）和 D-乳酸。还原型谷胱甘肽（GSH）与 DTNB 与反应生成黄色复合物，该有
色物
质在 412nm 处有特征吸收峰；通过检测 412nm 处上升速率，进而得出乙二醛酶Ⅱ
（GlyⅡ）酶活性的大小。
二、测试盒组成和配制：
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、低温离心机、研钵、
蒸馏水。
四、乙二醛酶Ⅱ(GlyⅡ)活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
称取 0.1g 组织样本（水分充足可取 0.2g），先加入 1mL 的提取液，冰浴匀浆，12000rpm，
4℃离心 10min，上清液待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂预热至室温（25℃），在 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中依次加入下列试
剂（依据样本检测数量，试剂一和二可按照比例 570:20 提前混合，直接加 590μL
即可）：
【注】：1. 若ΔA 值在零附近徘徊，可增加样本加样体积 V1（如增至 200μL，则
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
提取液 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 30mL×1 瓶试
4℃保存
试剂二
液体 1mL ×1 支
4℃保存
试剂三
粉体 mg×2 支
-20℃保存
每支用前甩几下使试剂落入底部，分别加
0.55mL 蒸馏水完全溶解备用，溶好的试剂
可-20 度分装保存，禁止反复冻溶。
标准品
粉体 mg×支
-20℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
试剂名称（
μL）
测定管
样本
100
试剂一
570
试剂二
20
试剂三
20
混匀，室温（25℃）下，30s 后立即于 412nm
处读取吸光值 A1，3min 后再读取 A2。
ΔA=A2-A1。本试剂盒仅供科研使用
2
试剂一相应减少），或增加反应时间 T（如增至 10min 后读取 A2），或增
加样本取样质量 W。则改变后的 V1 和 T 和 W 需代入公式计算。
2. 若ΔA 值大于 0.8 或者 A1 值大于 1.2，则需减少样本加样体积 V1（如减至
50μL，则试剂一相应增加），或减少反应时间 T（如减至 1min 后读取 A2）。
则改变后的 V1 和 T 需代入公式计算。
五、结果计算：
1、标准曲线为 y = 0.0199x - 0.0105；x 为标准品摩尔质量（nmol），y 为ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1nmol 的 GSH 定义为一个酶活力单位。
GlyⅡ(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0105)÷0.0199]÷(V1×Cpr)÷T=167.5×(ΔA+0.0105)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
酶活定义：每克组织样本每分钟生成 1nmol 的 GSH 定义为一个酶活力单位。
GlyⅡ(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0105)÷0.0199]÷(W×V1÷V)÷T=167.5×(ΔA+0.0105)÷W
V1---加入样本体积，0.1mL；
V---加入提取液体积，1mL；
W---样本质量，g；
T---反应时间，3min；
Cpr---蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1
制备标准品母液（10μmol/mL）：标准品溶于 1mL 蒸馏水中，（母液需在两天内用且-20℃保存）。
2
把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. μmol/mL。也可根据实际样
本来调整标准品浓度。
3
依次在 EP 管中加入 100μL 标准品+590μL 试剂一+20μL 试剂二，混匀后静置 5min 后全部液体转
移至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中，于 412nm 读值，根据结果即可制作标准曲线。
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