- ￥630
- wksubio
- WS3210F
- 国内
- 2025年09月23日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Dehydrogenase (DHA) Kit
- CAS号：
WS3210F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
脱氢酶（dehydrogenase, DHA）试剂盒说明书
(货号：WS3210F 分光法 48 样)
一、产品简介：
脱氢酶(DHA) 是一类催化物质氧化还原反应的酶，传统方法是用氯化三苯基四氮唑（TTC）作为脱氢
酶的氢受体，但生成的有色物质甲臜是不溶于水以至操作麻烦，且灵敏度低；本试剂盒提供一种简单，灵
敏，快速的测定方法，利用改性的氮四唑盐作为氢受体，其生成的橙黄色甲臜物质易溶于水，于 460nm 测
定其吸光值，即得脱氢酶活性。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 2ml×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 35mL×1 瓶
4℃保存
三、所需的仪器和用品：
分光光度计、1mL 玻璃比色杯（光径须为 1cm）、天平、恒温培养箱或水浴锅、可调式移
液器、低温离心机、冰、蒸馏水。
四、脱氢酶（DHA）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样
本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min。
取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
②细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提
取液；冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 300W，超声 3s，间隔 7s，重复 30 次）；
12000rpm，4℃离心 10min。，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进
行提取。
③ 液体样本：澄清的液体样本直接检测；若浑浊则离心后取上清液再测。
2、上机检测：
① 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 460nm，蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
空白管（仅做一次）
样品
80
蒸馏水
80
试剂一
40
40
试剂二
630
630
充分混匀，37℃恒温培养箱，完全避光培养 3h，全部转
移至 1mL 玻璃比色杯中，于 460nm 处读取吸光值，△A=A
测定-A 空白。本试剂盒仅供科研使用
五、结果计算：
1、按照样本质量计算
酶活单位定义：在 37℃时，每克样品每分钟催化产生 1μg 甲臜物质为一个酶活单位。
DHA（μg / min /g 鲜重）=（△A÷ε÷d×V2×106×Mr）÷（W×V1÷V）÷T=1.05×△A÷W
2、按照蛋白浓度计算
酶活单位定义：在 37℃时，每 mg 蛋白样品每分钟催化产生 1μg 甲臜物质为一个酶活单位。
DHA（μg / min / mg prot）=（△A÷ε÷d×V2×106×Mr）÷（W×V1÷V）÷T = 1.05×△A÷Cpr
3、 按液体体积计算
酶活单位定义：在 37℃时，每 mL 样本每 min 催化产生 1 nmol 甲臜物质为一个酶活性单位。
DHA（μg / min /mL）=（△A÷ε÷d×V2×106×Mr）÷V1÷T=1.05×△A
ε----甲臜物质的摩尔消光系数，3.1×104 L / mol /cm
d----光径，1cm；
V----提取液体积，1mL；
V1----加入反应体系中样本体积，0.08mL；
V2----反应体系总体积，750μL =7.5×10-4L；
T----培养时间，3h=180min；
W----样品质量，g；
Mr----甲臜物质的分子量，624.47；
Cpr----蛋白浓度，mg/mL。建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
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脱氢酶(DHA)试剂盒
￥630
