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- 英文名:
(-)-(5aS,10bR)-5a,10b-Dihydro-2-(2,4,6-trimethylphenyl)-4H,6H-indeno[2,1-b][1,2,4]triazolo[4,3-d][1,4]oxazinium ChlorideMonohydrate
- 库存:
98
- 供应商:
北京孚博
- CAS号:
919102-70-8
- 规格:
1g
CAS:919102-70-8
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文献和实验相关专题 准备工作: ①制做选择平板LB+25 mg/l Kan。 ②核对好要转化的质粒 DNA,在15 ml Falcon tube 和cuvette(电转化用的石英样品槽,两面磨光,两面磨砂)标好质粒名称。将Falcon tube、cuvette、质粒DNA、SOC培养基按顺序对应置于冰上预冷或解冻。转化前将大肠杆菌(45 µl aliquot of E. coli DH10B Cell s)置于
培养箱中3h~6h,结束后吸去含受试物的培养液,用 PBS洗细胞两次,换入含10%血清的培养液,继续培养19h~22 h。 表达:接触受试物的细胞继续培养19h~22 h后用胰酶-EDTA 消化,待细胞脱落后,加入含10%血清的培养液终止消化,混匀,放入离心管以800r/min~1000r/min的速度离心5min~7min,弃上清液,制成细胞悬液,计数,以5×105 个细胞接种于直径为10 mm 的平皿,3d后传代,仍接种5×105个细胞培养3d(最-佳表达时间为6d~8d)。 细胞
。待凝胶聚合后(约20min~30min),轻轻拔出样品槽模板。将电泳缓冲液加入上、下电泳槽。将分离的蛋白质样品用0.01Mol/L Tris-HCl(pH8.0)-0.001Mol/L EDTA-1%SDS-5%硫基乙醇溶液作1︰1稀释,100℃加热处理3min之后,加入甘油10%及适当量溴酚兰,用微量注射器将样品注入样品槽中,蛋白质最后浓度一般为0.05mg/ml~1mg/ml。 ⑶电泳:上端接阴极,下端接阳极。电压120V、电流30mA,电泳时间5h~6h,待染料泳至距底部约1cm处
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