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- 2025年07月17日
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上海维亦特生物
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48T/96T
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文献和实验【专题讨论】杆状病毒——昆虫细胞蛋白表达系统，影响蛋白表达的因素？
-6及阳性对照Bacmid/CAT，已构建成功。 2. 昆虫细胞Sf9、High Five及其相关培养基、转染试剂均购自Invitrogen公司。抗His单克隆抗体购自Oncogene公司，CAT-ELISA试剂盒购自 Roche。 实验步骤： 一、 昆虫细胞转染： 1． Sf9细胞计数，取6孔板中的两孔，每孔加入9×10 5个细胞(其中一孔设为正常对照)，并以全培培养至少1小时，使细胞贴壁。 2． 准备重组质粒和细胞转染试剂的混合物： a. 溶解1μg纯化重组杆状
= 抗原（待测）-抗体 + 抗体-抗原-ED抗体-抗原-ED 具有酶的活性，加底物显色。一类是抗体能增强酶的活性，将甲状腺素(T-)与苹果酸脱氢酶(MDH)共价结合成酶标记物后，MDH活性被抑制；当标记抗原与特异性抗体结合时，被抑制的酶的活性可逆性地恢复；如样品中T4含量增多，竞争结合抗体，MDH活性仍被抑制；酶的活性与待测样品中抗原的量成反比。上述酶标抗原与抗体结合后，酶的活性增强与减弱是由于抗原与抗体的结合位置邻近酶的活性中心。也有用直接与酶活性中心反应的辅助因子或底物等小分子化合物标记
机制比较复杂，不仅需借助苹果酸、草酸乙酸的氧化还原，而且还要借助α酮酸与氨基酸之间的转换，才能使胞液中来的NADH的还原当量转移进入线粒体氧化，具体过程如图6－10。 图6-10 苹果酸-天冬氨酸穿梭� GOT：谷草转氨酸；MDH：苹果酸脱氢酶 当胞液中NADH浓度升高时，首先还原草酰乙酸成为苹果酸，此反应由苹果酸脱氢酶催化，胞液中增多的苹果酸可通过内膜上的二羧酸 载体 系统与线粒体内的α酮戊二酸交换；进入线粒体的苹果酸，经苹果酸脱氢酶
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