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依诺赞(江苏)生物科技有限公司
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50U
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文献和实验化的情况,但不能对甲基化的CpG位点进行定位。 2.1.2 SssI 甲基转移酶法[22] SssI甲基转移酶能够催化DNA的CpG位点发生甲基化。3H-S-腺苷甲硫氨酸(3H-SAM)在SssI甲基转移酶催化作用使基因组DNA的CpG位点发生甲基化。通过测定剩余的放射性标记的SAM即可得到原基因组整体甲基化水平,即测到的放射性强度与所测DNA甲基化水平成反比。这种方法的缺点是所使用的SssI甲基转移酶不稳定,致结果不够精确。 2.1.3 免疫化学法[23] 这种方法是基于单克隆抗体能够与5mC发生
酶的区域性甲基化分析是一种定量区域性CpG甲基化密度研究方法。基因组DNA在亚硫酸氢钠处理后,感兴趣的区域由包含dam位点的引物扩增。扩增后的PCR产物与14 C标记的SAM及dam甲基转移酶温育,作为标准DNA定量的内参照。之后将3 H标记的SAM和M.SssI甲基转移酶温育。在每个检测中使用具有确定甲基化位点细胞系DNA的标准混合物,每个样品的3 H/14 C比值转化为所测序列的甲基化密度百分比。该方法不能确定单独CpG位点的甲基化状况。
酶的区域性甲基化特异性分析 (ERMA) 酶 的区域性甲基化分析是一种定量区域性CpG甲基化密度研究方法。基因组DNA在亚硫酸氢钠处理后,感兴趣的区域由包含dam位点的引物扩增。扩增后的PCR产物与14 C标记的SAM及dam甲基转移酶温育,作为标准DNA定量的内参照。之后将3 H标记的SAM和M.SssI甲基转移酶温育。在每个检测中使用具有确定甲基化位点细胞系DNA的标准混合物,每个样品的3 H/14 C比值转化为所测序列的甲基化密度百分比。该方法不能
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