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- 上海科梦达生物
- 上海
- LKG483
- 2025年07月15日
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上海科梦达生物
- 规格：
200ml
用途：又称样本密度分离液，由聚蔗糖400和泛影酸钠等配制而成。用于分离人外周血淋巴细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。其分离原理是根据血细胞的密度差异（红细胞和粒细胞密度为 1.090 g/mL 左右；淋巴细胞和单核细胞密度为 1.075~1.090g/mL；血小板为 1.030~1.035 g/mL），通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将淋巴细胞从人外周血或脐带血中分离出来。
注意事项：无菌溶液，密度为1.077±0.003g/ml，渗透压 290~350 mOsm/kg H2O，经0.1μm 滤膜过滤除菌。分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心，可能会导致白膜层不清晰。
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文献和实验人外周血PBMC的制备流程 收集抗凝人外周血，用 1640 无血清培养基或 PBS 按照 1:1 的比例稀释，上下颠倒混匀或者用移液枪吹打混匀。 在 15 mL 离心管中，先加入 3 mL 充分混匀的 Ficoll 液（1.077 g/mL），再沿着管壁缓慢加入2 mL稀释后的血液，血液和 Ficoll 液分层明显为成功。 注：Ficoll 提前半小时从 4℃ 冰箱取出恢复到室温，温度过高会导致分离不明显，温度过低会导致密度过大，同样分离效果不好， 20~25℃ 最佳。。 将样本小心转移
问：FICOLL离心后分界面不清楚一般是什么原因？答：原因有很多种：1、FICOLL没有室温平衡；2、血液稀释时没有充分混匀；3、加血的时候就分层不清；4、血液抗凝不充分，细胞成块，建议采好血后室温放置半小时~1小时期间不时的混匀；5、个体差异，同一种实验条件，不同来源血可能情况不一；6、离心速度过小以致尚未完全分层，或离心期间速度不稳定；7、降速太快，降速时间应5min以上。答：1、比例要恰当：稀释后的血液：淋巴细胞分离液为1：1。2、血液平铺到淋巴细胞分离液上是否分层清晰？3、离心机不能
Ficoll：一种已灭菌的，特定密度的密度梯度离心介质。被广泛用作从外周血、骨髓及脐带血中分离高活性的单个核细胞。 Ficoll-Paque溶液包含： Ficoll PM400：由高分子量蔗糖（Mr 400K）聚合物与表氯醇聚合合成(凝集红细胞) 泛影酸钠：使溶液在低粘度下具有高密度 EDTA二钠钙 Ficoll的保存：开盖前保存在4℃~30℃（避光），开盖后保存在 4℃~8℃（避光） Ficoll 产品细分如下： 使用Ficoll (1.077g/ml) 分离人外周血
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