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文献和实验盒抗原和抗体的来源,索要试剂盒说明书,然后利用网络确认这些信息,正规的ELISA生产商,这些信息都是非常齐全,如果信息不全,则该ELISA的制造水平和质量都会很差。造假三:某些奸商为了夸大其生产ELISA涵盖的指标的范围,用一种指标来冒充其它指标,造成各种种属、各种指标都可以做的假象。比如用TGFβ这样的指标代替大多数试剂盒的其他指标作为检测抗体,同样可以获得良好的标准曲线。因为TGFβ在大多数哺乳类动物中(人、大鼠、小鼠、猪、牛……)都有广泛表达,种属间抗原的氨基酸序列同源性达100%,TGF
ELISA protocol: 1.取5-10ul BMMY表达上清用0.05M NaHCO3稀释到100ul铺ELISA板,37度或室温振荡大于1小时。注意一定要做一个GS115空菌株表达上清作为阴性对照,最好还找一个带有histag的蛋白作为阳性对照。 2.TPBS洗板3次,方法:倒掉铺板液,倒置于毛巾上轻轻拍打几次,加TPBS至满,重复。 3.加封闭液(TPBS加1%脱脂奶粉)350ml/孔,室温下放置40分钟-1小时,TPBS洗3次。 4.加封闭液稀释
到细胞外;微囊泡(Microvesicles)直径为 100-1000 nm,以出芽的形式释放到细胞外;凋亡小体(Apoptotic body)直径为 50-2000 nm,由凋亡细胞产生。由于各种胞外囊泡的大小可能有交叉,所以要想通过分离手段得到某种纯化的特定囊泡是很难实现的。 图一 胞外囊泡的分泌 (图片来源于文献) 外泌体携带有细胞来源相关的多种蛋白质、脂类和核酸,其中蛋白质包括跨膜蛋白、信号转导蛋白、细胞支架蛋白、酶等,现在很多文献会选择其中的几种膜蛋白和膜内蛋白作为外泌体的鉴定
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